人脐静脉内皮细胞的体外分离培养及鉴定

• 作者: 刘小丽 刘惠萍 叶赞 李春梅 王若光 秦明春 秦莉花
• 来源期刊: 湖南中医药大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 人脐静脉内皮细胞 细胞培养 流式细胞术 细胞周期 分离 鉴定
• 年，卷（期）: 2007,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 12-15
• 页数: 4页
• 分类号: R458.8
• 字数: 4354字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-070X.2007.04.005

摘要

目的 探讨人脐静脉内皮细胞的原代培养方法,提高体外分离培养血管内皮细胞的成功率.建立血管内皮细胞培养模型,为体外研究血管内皮细胞提供实验基础.方法 取2根脐带(至少20 cm)冲净淤血,采用加工穿刺针固定脐静脉灌注消化液,一根用0.2%胶原酶Ⅱ,另一根用0.1%胶原酶Ⅰ和0.25%胰酶等比混合消化液,比较两种酶的消化效果.收集细胞并用舍有10 ng/Ml的VEGF的培养基中培养,观察细胞的生长及传代.并在倒置显微镜下观察细胞的形态学特点,同时用免疫组织化学的方法对所得细胞进行鉴定.用流式细胞术观察细胞周期.结果 两种消化酶方法均获得了相当数量的人脐静脉内皮细胞,胶原酶Ⅱ的消化效果稍优于混合消化酶,且比较理想的消化时间均为13 min,细胞接种后4～5h开始贴壁生长,1周左右可生长成单层,光镜下呈多角形,"铺路石"样排列,免疫组织化学法可见内皮细胞胞策中人第Ⅷ因子相关抗原呈阳性反应.细胞周期显示约有50.6%的细胞处于G0/G1期.结论 胶原酶Ⅱ和胶原酶Ⅰ与胰酶等比混合消化液灌注法是获得脐静脉内皮细胞的一种可取方法,而胶原酶是分离培养脐静脉内皮细胞的首选消化液,成功率高,可靠性大,可成功构建体外研究血管内皮细胞的模型.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王若光	湖南中医药大学中西医结合学院	110	1194	19.0	28.0
2	李春梅	湖南中医药大学中西医结合学院	26	294	11.0	16.0