层黏连蛋白与脑微血管内皮细胞对共同植入缺血模型大鼠脑内神经干细胞增殖与凋亡的调节

• 作者: 张晓梅 朱晓峰 王玉琳
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 移植体 缺血 增殖 凋亡
• 年，卷（期）: 2007,（20）
• 所属期刊栏目: 研究与报告
• 页码范围: 3960-3963
• 页数: 4页
• 分类号: R394.2
• 字数: 6151字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2007.20.026

摘要

目的:将由神经干细胞、层黏连蛋白、脑微血管内皮细胞构建的共移植体植入缺血模型鼠大脑内,观察共移植体中神经干细胞的增殖和凋亡.方法:实验于1996-01/1996-12 在佳木斯大学神经科学所完成.实验材料:同一基因背景Wislar大鼠,体质量300～350 g,雄性,6月龄,购自哈尔滨医科大学实验动物学部.实验方法:①取出生24 h内Wistar新生鼠,培养冲经干细胞.②将传代脑微血管内皮细胞消化后,以3×107L-1密度接种于培养瓶中,12 h贴壁后吸出脑微血管内皮细胞培养液,涂以一层细胞外基质后,接种经0.125%胰酶消化20 min后吹打成单细胞的神经干细胞悬液,密度为6×108L-1,加入神经干细胞完全培养液.培养3～6 h,镜下观察神经干细胞完全贴壁后,吸出培养液,再涂以一薄层细胞外基质,接种以上相同密度脑微血管内皮细胞,加入神经干细胞完全培养液.共培养12～24 h,镜下观察脑微血管内皮细胞.利用免疫荧光方法检测共移植体.③制备大鼠脑缺血模型.模型制备完成后大鼠虽然有脑缺血症状,但伴下列情形之一的不纳入:神经学症状评分低于2分;取脑时发现蛛网膜下腔出血;脑组织石蜡切片苏木精-伊红染色无缺血病理改变;未到观察时相点便死亡的.共48只大鼠模型制作成功.将Wistar大鼠随机分为神经干细胞组、共移植体组,每组24只.2组分4个时间点3,7,14,60 d,每个时间点6只.模型建立后3 d,神经干细胞组移植神经干细胞,共移植体组移植共移植体,各5 μL.移植前神经干细胞经Brdu 5 mmol/L标记3 d,再将其溶解于PBS中,细胞密度调整为2×1011L-1,移植部位为右侧纹状体区.通过免疫组织化学和免疫荧光方法观察神经干细胞增殖和凋亡情况.结果:48只大鼠均进入结果分析.①神经干细胞增殖情况:细胞数3 d开始增加,14 d达高峰,60 d减少.两组3,7,14,60 d细胞数相比,差异显著(神经干细胞组:19.57±4.27,22.25±4.53,39.13±4.52,7.13±2.75;共移植体组:39.88±4.26,40.50±4.03,56.88±9.33,17.13±4.09,P＜0.05,P＜0.01).3,7 d细胞增殖数较稳定,Brdu阳性细胞主要集中在针迹部位,14 dBrdu阳性细胞最多,散在分布,部分与周围组织整合,60 d Brdu阳性细胞细胞数下降,大部分已与周围组织整合.②神经干细胞凋亡率情况:随着时间延长,共移植体组细胞凋亡率降低,与神经干细胞组相比,差异显著[单纯神经干细胞组3,7,14,60 d分别为:(35.57±1.85)%,(28.58±1.26)%,(17.86±1.32)%,(2.05±0.67)%;共移植体组分别为:(24.77±2.44)%,(22.75±3.40)%,(9.88±1.81)%,(0.75±0.32)%,P＜0.05,P＜0.01].结论:层黏连蛋白和脑微血管内皮细胞与神经干细胞共移植体移植入缺血模型大鼠脑内可明显促进神经干细胞增殖,减少其凋亡.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱晓峰	佳木斯大学神经科学研究所	128	527	12.0	15.0
2	张晓梅	佳木斯大学神经科学研究所	27	90	6.0	8.0
3	王玉琳	佳木斯大学神经科学研究所	1	1	1.0	1.0