RNA干扰技术抑制成骨细胞核激活因子受体配体基因对破骨细胞生成的影响

• 作者: 张晖 裴福兴 镐英杰 高坤
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: RNA干扰 核激活因子受体配体 大鼠 成骨细胞 基因沉默
• 年，卷（期）: 2007,（27）
• 所属期刊栏目: 研究快报
• 页码范围: 5417-5420
• 页数: 4页
• 分类号: R336
• 字数: 4537字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2007.27.041

摘要

目的:利用RNA干扰技术抑制大鼠成骨细胞核激活因子受体配体(Ligand of receptor activator of NF-κB,RANKL)的表达,观察成骨细胞RANKL/骨保护素(osteoprotegerin,OPG)比值变化,探讨成骨细胞与破骨细胞生成的相关性.方法:实验于2006-05/10在四川大学华西医院移植免疫实验室(国家重点实验室)完成.①实验材料:体外化学合成4条RANKL序列特异性小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),用Lipofectin2000TM转染成骨细胞.②实验方法:采用荧光实时定量聚合酶链反应检测RANKL mRNA的表达,筛选出最有效的干扰序列.③实验分组:分为最有效的siRNA转染组、阴性对照组和空白对照组,每组设5个平行样本.采用免疫组织化学染色检测成骨细胞中RANKL、OPG蛋白的表达,观察FANKL/OPG比值变化.④实验评估:采用成骨细胞、破骨细胞共培养技术观察以上3组转染后的成骨细胞对破骨细胞生成的影响.结果:①4种siRNA敲除RANKL基因后mRNA的表达:4种siRNA转染成骨细胞后,相对空白对照组,siRNA4分子对RANKL mRNA的抑制作用最为明显,达到89%.siRNA1,siRNA3对RANKL mRNA的抑制作用大于50%,而siRNA2对RANKL mRNA的也有相当的抑制作用.②各组成骨细胞中RANKL和OPG蛋白水平:RANKL和OPG的阳性表达均显示为棕黄色颗粒,RANKL主要分布于成骨细胞的胞浆和胞膜,OPG主要分布于成骨细胞的胞浆.siRNA4转染组RANKL表达(平均积分光密度值)低于空白对照组(分别为3.05±2.17,11.31±1.26),差异有显著性意义(P＜0.01);阴性对照组与空白对照相比,差异无显著性意义(P＞0.05).siRNA4转染组、阴性对照组OPG表达与空白对照组比较,差异均无显著性意义(P＞0.05).siRNA4转染组RANKL/OPG比值低于空白对照组(分别为0.12±0.03,0.45±0.04),差异有显著性意义(P＜0.01).③转染的成骨细胞对破骨细胞生成的影响:各组共培养形成的破骨细胞形态与分离的成熟破骨细胞相似,为不规则形,胞浆红染,并有伪足形成.siRNA4转染组破骨细胞形成低于空白对照组、阴性对照组[分别为(12±2),(31±7),(28±5)个/孔],差异有显著性意义(P＜0.01);阴性对照组与空白对照相比,差异无显著性意义(P＞0.05).结论:RNA干扰沉默RANKL表达可下调成骨细胞RANKL/OPG比值,抑制破骨细胞的生成.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	裴福兴	四川大学华西医院骨科	488	4741	33.0	48.0
2	张晖	四川大学华西医院骨科	57	367	11.0	17.0
3	镐英杰	四川大学华西医院骨科	6	38	4.0	6.0
4	高坤	四川大学华西医院骨科	5	36	4.0	5.0