禽流感H5亚型病毒血凝素基因的表达和抗原性分析

• 作者: 刘丽玲 包红梅 杨忠萍 王昱 王秀荣 田丽娜 石锐 陈化兰
• 来源期刊: 黑龙江畜牧兽医
• 学科: 农学
• 关键词: 禽流感病毒 H5亚型 血凝素 表达 抗原性分析
• 年，卷（期）: 2007,（7）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 23-26
• 页数: 4页
• 分类号: S852.65
• 字数: 4096字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-7034.2007.07.011

摘要

参考已发表的Guangdons/96/1(H5N1)基因序列设计引物,用鸡胚扩增中国农业科学院哈尔滨兽医研究所国家禽流感参考实验室保存的病毒,收集尿囊液,提取病毒RNA,经RT-PCR扩增HA基因,将PCR产物平端克隆到pMD18-T中,经酶切、PCR及测序鉴定后,定向亚克隆到pET-30a表达载体中.重组子经酶切和测序鉴定为正确后,用IPTG诱导表达,SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳和薄层扫描分析重组蛋白的表达情况.重组蛋白r5HA经Ni-NTA His·Bind(R) Resins纯化,并复性,用Western Blotting分析重组蛋白的抗原性.结果表明:表达产物大小约为65 ku,主要存在于包涵体中,表达量约占总蛋白的30%;同时,表达的重组蛋白具有较好的抗原性和特异性,可以用作检测H5亚型禽流感病毒抗血清的捕获抗原.