问号钩端螺旋体胶原酶在钩体病豚鼠模型的肺组织中的表达

• 作者: 傅爱芬 姜叙诚 徐静 李文俊 杨宏亮 胡宝瑜 赵伶兹 郑林 郭晓奎
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 问号钩端螺旋体 胶原酶 致病机制
• 年，卷（期）: 2007,（7）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 647-651
• 页数: 5页
• 分类号: R377.5
• 字数: 5313字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2007.07.004

摘要

目的 通过克隆、表达问号钩端螺旋体赖型赖株的胶原酶基因colA(LA0872),以及制备抗胶原酶的多克隆抗体,观察胶原酶在钩体病豚鼠模型的组织中的表达,为研究其致病机制奠定基础.方法 以问号钩端螺旋体赖型赖株基因组DNA为模板,用PCR扩增colA,产物克隆到表达载体pET-28b(+)中,构建含colA的重组质粒;将重组质粒转入E.coliRosetta(DE3)菌株内,IPTG诱导表达后用Ni-NTA His-Bind亲和层析柱纯化重组蛋白;用纯化的重组蛋白免疫家兔制备抗胶原酶的多克隆抗体;MaxVision二步法染色检测胶原酶在感染钩端螺旋体的豚鼠肺组织中的分布.结果 克隆表达目的基因,并成功制备了抗胶原酶的多克隆抗体.免疫组化显示在出血的肺组织中存在胶原酶.结论 钩体病豚鼠模型的肺组织中有胶原酶的表达,并且存在于有钩端螺旋体分布的部位.本研究为进一步探讨胶原酶在钩端螺旋体侵袭和宿主组织出血中所起的作用奠定了基础.