问号钩端螺旋体colA基因产物胶原酶活性及其致病机制研究

• 作者: Kokouvi Kassegne 严杰 汪浙炯 胡玮琳 谈潘莉 赵金方
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 问号钩端螺旋体 colA基因 胶原酶 表达 分泌
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 7-12
• 页数: 6页
• 分类号: R377.5
• 字数: 4226字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2016.01.002

摘要

目的 了解不同问号钩端螺旋体(简称钩体)血清群colA基因分布和序列保守性、表达产物胶原酶活性以及感染细胞时colA基因表达水平变化和产物分泌情况.方法 采用PCR及其产物测序法检测我国主要流行的7个问号钩体血清群代表株中colA基因并了解其序列保守性.构建问号钩体黄疸出血群赖型赖株colA基因原核表达系统,Ni-NTA亲和层析法提取表达的目的重组蛋白rColA.采用分光光度法检测rColA水解Ⅰ～ⅣV型天然胶原蛋白及Azocoll和Pz-肽合成底物能力并测定其Km和Keat值.采用实时荧光定量RT-PCR和Western Blot分别检测问号钩体赖株感染HUVEC、BEAS-2B、L 02、HEK293细胞时colA mRNA水平变化及ColA分泌情况.结果 不同血清群问号钩体均能扩增出全长colA基因片段,其核苷酸和氨基酸序列相似性高达99.4％～100％.所构建的colA基因表达系统能有效表达rColA.rColA能不同程度地水解上述6种底物,但水解Ⅲ型胶原蛋白能力最强(P＜0.05),其Km和Kcat值分别为2.16 mg/mL和35.6 h-1.问号钩体赖株感染各靶细胞时colA-mRNA水平显著升高(P＜0.01),问号钩体-细胞共培养物上清中可检出ColA.结论 问号钩体colA基因为序列保守、分布广泛的胶原酶编码基因,感染细胞时该基因产物表达上调并外分泌,从而在问号钩体感染宿主过程中发挥实际作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	严杰	浙江大学医学院病原生物学系	265	1149	14.0	20.0
2	谈潘莉	浙江中医药大学附属第一医院检验科	11	40	4.0	6.0
3	赵金方	浙江中医药大学附属第一医院检验科	11	63	5.0	7.0
4	胡玮琳	浙江大学医学院病原生物学系	13	17	3.0	4.0
5	汪浙炯	浙江中医药大学附属第一医院检验科	5	19	2.0	4.0
6	Kokouvi Kassegne	浙江大学医学院病原生物学系	1	0	0.0	0.0