问号钩端螺旋体fliN基因原核表达及其产物的鉴定

• 作者: 严杰 孙爱华 孙琦 陈蔚青
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 问号钩端螺旋体 fliN基因 克隆 原核表达 鉴定
• 年，卷（期）: 2008,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 30-32,62
• 页数: 4页
• 分类号: R377
• 字数: 2521字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2008.01.008

摘要

目的 克隆问号钩端螺旋体(简称钩体)黄疸出血群赖型赖株鞭毛相关基因fliN并构建其原核表达系统,鉴定表达产物的免疫性.方法 提取钩体株基因组DNA,高保真PCR扩增全长fliN基因片断,T-A克隆后测序.按常规方法 构建fliN基因原核表达系统,并用IPTG诱导目的 重组蛋白rFliN表达.采用SDS-PAGE结合Bio-Rad凝胶图象分析系统检测rFliN表达量,Ni-NTA亲和层析法提纯rFliN.采用兔抗问号钩体黄疸出血群赖株全菌抗血清的Western blot鉴定rFliN及其免疫反应性.结果 与报道的相应序列比较,所克隆的fliN基因核苷酸和氨基酸序列相似性均为100%.IPTG诱导原核表达系统pET32a-fliN-E.coliBL21DE3的rFliN表达量约占细菌总蛋白的30%,rFliN提纯后仅见单一的蛋白条带.rFliN能与抗血清发生免疫结合反应.结论 本研究成功地构建了高效表达目的 重组蛋白的问号钩体fliN基因原核表达系统,RFliN有良好的免疫反应性,为深入研究FliN致病及免疫保护作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈蔚青	浙江树人大学生物与环境工程学院	36	238	7.0	14.0
2	孙爱华		112	523	11.0	15.0
3	孙琦		20	69	5.0	8.0