高亲和力的农药克百威单克隆抗体的制备及鉴定

• 作者: 吴青 孙远明 杨金易 潘科 王弘 肖治理 郑晓锋 雷红涛
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 克百威 单克隆抗体 免疫化学分析
• 年，卷（期）: 2007,（3）
• 所属期刊栏目: 植物保护
• 页码范围: 518-523
• 页数: 6页
• 分类号: S4
• 字数: 4948字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0578-1752.2007.03.013

摘要

[目的]制备高亲和力农药克百威单克隆抗体,建立克百威残留免疫检测方法,控制克百威残留,保障人民身体健康与保护环境.[方法]合成克百威半抗原BFNB,用人工抗原BFNB-BSA免疫Balb/c小鼠,取脾细胞与骨髓瘤细胞在PEG4000作用下融合,经间接ELISA筛选及显微克隆法亚克隆,分离出阳性细胞株,腹水诱导法及辛酸-硫酸铵沉淀法大量制备及纯化单克隆抗体,间接ELISA法测定抗体滴度及亲和力,间接竞争ELISA法测定抗体特异性.[结果]获得1株稳定分泌抗克百威单克隆抗体的杂交瘤细胞株5D3,其培养上清和腹水抗体滴度分别为1﹕2.048×103和1﹕1.024×106,其抗体亚类为IgG1,亲和力常数为2.54×109 L·mol-1,IC50为1.18 ng·ml-1,最低检测限为0.01 ng·ml-1.与克百威降解产物呋喃酚的交叉反应率为4.59×10-4%,另外几种结构类似的氨基甲酸酯类农药的交叉反应率均小于3.0×10-4%.[结论]此抗克百威的单克隆抗体亲合力高、特异性强,为建立克百威简便、快速、特异的免疫检测方法奠定了基础.