血清4型禽腺病毒penton蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

• 作者: 罗思思 邓显文 谢芝勋 张艳芳 张民秀 谢志勤 谢丽基 李孟 王盛 李小凤 广西兽医研究所/广西兽医生物技术重点实验室/农业农村部中国(广西)—东盟跨境动物疫病防控重点实验室
• 来源期刊: 南方农业学报
• 关键词: 血清4型禽腺病毒 penton蛋白 单克隆抗体 杂交瘤细胞株
• 年，卷（期）: 2023,（10）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医·水产·蚕桑
• 页码范围: 277-284
• 页数: 8页
• 语种: 中文

摘要

【目的】制备和鉴定血清4型禽腺病毒（FAdV-4）五邻体（penton）蛋白单克隆抗体，为深入探究penton蛋白在FAdV-4感染致病机制中的作用及为抗原检测试剂研发提供抗体材料。【方法】以原核表达的FAdV-4 penton重组蛋白免疫6～8周雌性BALB/c小白鼠，加强免疫3次后，取鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合，通过penton-酶联免疫吸附剂测定（ELISA）和FAdV4 virus-ELISA方法分别筛选阳性杂交瘤细胞株，对筛选出的单克隆抗体杂交瘤细胞株进行亚类鉴定、特异性和广谱性鉴定及间接免疫荧光和稳定性试验。【结果】亚类鉴定结果表明，筛选获得7株能稳定分泌抗FAdV-4 penton蛋白的杂交瘤细胞株（1D11、2B3、2C4、2C9、6B3、8F12和8G11），其轻链均为Kappa链，重链3株为IgG1,4株为IgG2b；特异性检测结果表明，7株单克隆抗体只与FAdV-4反应，不与其他11种血清型FAdV及NDV、ARV、EDSV和IBV等常见禽病病原体发生交叉反应；广谱性鉴定结果表明，7株单克隆抗体均可与19株FAdV-4分离株结合，广谱性好；间接免疫荧光试验结果表明，7株单克隆抗体均与感染FAdV-4的鸡胚肝细胞（CEL）结合，出现明亮的绿色荧光。对筛选出的3株单克隆抗体（6B3、8F12和8G11）进行稳定性检测，发现其稳定性良好。【结论】通过单克隆抗体制备和鉴定获得3株与FAdV-4蛋白结合效果较好并具有特异性和广谱性的FAdV-4 penton蛋白杂交瘤细胞株（6B3、8F12和8G11），能稳定分泌penton蛋白单克隆抗体，为深入研究penton蛋白在FAdV-4感染致病机制中的作用提供单抗，为FAdV-4抗原检测试剂的研发打下基础。