抗鸭乙肝病毒core蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

• 作者: 冯艾 刘正稳 张琳 惠凌云 杨广笑 王亚文 王全颖 王威
• 来源期刊: 西安交通大学学报（医学版）
• 关键词: 鸭乙肝病毒 核心蛋白 单克隆抗体 细胞克隆
• 年，卷（期）: 2013,（6）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 768-772
• 页数: 5页
• 分类号: Q78|R392
• 语种: 中文
• DOI: 10.7652/jdyxb201306014

摘要

目的 制备抗鸭乙肝病毒core蛋白的单克隆抗体并进行鉴定.方法 PCR扩增鸭乙肝病毒(DHBV) core基因片段,构建表达载体pET28a(+)/DHBV core.转化诱导表达融合蛋白,用Ni2+亲和柱纯化目的 蛋白.免疫Balb/c小鼠,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,ELISA筛选,采用有限稀释法筛选单克隆杂交瘤细胞并进行细胞克隆.体内诱生法大量制备单克隆抗体,进行抗体的特异性、效价和亚型的鉴定.结果 成功构建表达载体pET28a(+)/DHBV core,并表达DHBV core蛋白.获得2株稳定分泌抗DHBV core抗体的杂交瘤细胞株,分别为2D7和5G10,细胞培养液抗体效价为1:400和1:800.选择5G10细胞株制备单克隆抗体,小鼠腹水抗体效价可达1:320000.鸭肝组织免疫组化结果显示,DHBV病毒载量>1010copies/mg的肝组织中DHBV core蛋白的表达明显高于病毒载量<105 copies/mg的肝组织,而未感染DHBV的鸭肝细胞内不表达DHBV core蛋白.亚型鉴定结果为IgG2a κ链.结论 制备并获得了抗DHBV core蛋白的单克隆抗体,为DHBV core蛋白的功能研究、诊断试剂的研制与抗病毒治疗研究奠定了基础.