hTERT-siRNA表达载体的构建及对MCF-7细胞生长、端粒酶活性的抑制作用

• 作者: 张志宏 曾永秋 田强 税青林 赵小平 黄燕
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: RNA干扰 siRNA表达载体 基因,hTERT 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2007,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 561-564
• 页数: 4页
• 分类号: R737.9
• 字数: 3172字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0577-7402.2007.06.005

摘要

目的 构建人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的RNA干扰(RNAi)表达载体,并研究该载体对乳腺癌MCF-7细胞端粒酶活性及细胞增殖的影响,为针对端粒酶的乳腺癌基因治疗提供新的途径.方法 设计针对人端粒酶逆转录酶催化亚基(hTERT)的干扰靶序列TGTTCAGCGTGCTCAACTA,构建重组siRNA表达质粒pGenesil-hTERT,同时构建不针对任何基因的阴性对照重组pGenesiL-HK.两种重组质粒经酶切、电泳分析和测序鉴定后,用脂质体转染法分别转染乳腺癌MCF-7细胞,应用端粒酶重复序列扩增聚合酶链反应(TRAP-PCR)及聚丙烯酰胺凝胶电泳检测端粒酶活性,流式细胞仪测定细胞凋亡率.结果 酶切电泳测序分析表明插入序列正确,重组质粒构建成功.转染pGenesil-hTERT的MCF-7细胞,凝胶电泳见端粒酶特征性条带明显减少,端粒酶活性受到明显抑制pGenesil-hTERT转染细胞后凋亡率较对照组明显升高(P＜0.01),且转染48h凋亡率最高,达54.7%±2.41%.结论 hTERT-siRNA可有效抑制乳腺癌MCF-7细胞端粒酶活性、促进细胞凋亡,此法有望应用于肿瘤基因治疗.