骺板软骨细胞的体外培养及鉴定

• 作者: 尹航 张亚 张锡庆 王晓东 王科文
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 骨骺 软骨细胞 组织工程 体外发生 细胞培养
• 年，卷（期）: 2007,（6）
• 所属期刊栏目: 研究与报告
• 页码范围: 1025-1027,插2
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 4662字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2007.06.007

摘要

目的:建立体外培养及鉴定骺板软骨细胞的方法.方法:实验于2005-03/2006-05在苏州大学附属儿童医院骨科实验室完成.选用3只生后14～28 d的新西兰幼兔,空气栓塞处死,暴露股骨下端和胫骨上端,分别取2处的骺板组织,将其剪切成1～3 mm3的小块,经胰蛋白酶消化,接种于含150 g/L牛血清的1640培养基中,饱和湿度培养,传代.①细胞接种后3 h在倒置显微镜下观察细胞生长情况,见细胞贴壁后每天观察2次.②第2代细胞达到80%～90%左右汇合时采用常规苏木精-伊红染色,光镜观察细胞爬片情况.③第3代细胞爬片至细胞达到80～90 %左右汇合时,采用苏木素染色3 min,3%亮绿染色5 min,蕃红花"O"染色5 min,光镜观察细胞产生蛋白聚糖情况.④采用PCR检测细胞Ⅱ型胶原的表达.⑤采用四唑盐MTT比色法检测细胞活性.结果:①骺软骨细胞刚接种后呈大小不等之圆形悬浮于培养液中,3 h后见大部分细胞贴壁,24 h后贴壁细胞呈短梭形、圆形、三角形和不规则形,见细胞分裂相.48 h后见细胞伸展明显,细胞分裂相每高倍镜视野可见多个.经隔日换液细胞生长至第5天,细胞呈聚集生长,达到汇合状态,将细胞传代.接种后第1代细胞2 d后呈梭形,培养4 d传至第2代,第2代细胞长满瓶底后,90%呈胞膜较厚的圆形,10%为梭形,第3代、第4代亦如此.传至第5代见肥大细胞增多,细胞松散,折光性减弱,呈凋亡状态.②细胞爬片后观察骺软骨细胞形态以梭形居多,同时也有圆形、三角形和不规则形.可见细胞分裂及细胞中的分泌小泡.③见细胞呈红色,无绿色,证明蕃红花"O"-亮绿染色阳性,显示所培养的细胞可以分泌蛋白聚糖.④PCR检测术所养细胞含有Ⅱ型胶原,电泳带在440 bp上.⑤四唑盐MTT比色法检测显示,第3代骺软骨细胞的生长曲线近似倒"S"形,在第4,5,6天细胞呈对数生长,约在7,8,9,10 d达平台期,至第12天细胞出现生长抑制.结论:建立了骺板软骨细胞的体外培养方法,并证实所培养出的细胞分泌蛋白聚糖和Ⅱ型胶原,具有软骨细胞的共同特点.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张锡庆	苏州大学附属儿童医院骨科	62	342	10.0	15.0
2	王晓东	苏州大学附属儿童医院骨科	116	559	10.0	19.0
3	王科文	苏州大学附属儿童医院骨科	31	275	7.0	16.0
4	尹航	苏州大学附属儿童医院骨科	16	103	6.0	9.0
5	张亚	苏州大学附属儿童医院骨科	59	372	9.0	16.0