人外周血树突状细胞的分离与鉴定

• 作者: 吕成伟 尤长宣 罗荣城 马树东 高伟生
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 树突状细胞 粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 白细胞介素4
• 年，卷（期）: 2007,（11）
• 所属期刊栏目: 研究快报
• 页码范围: 2105-2108
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 5215字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2007.11.035

摘要

目的:体外分离培养并鉴定人外周血树突状细胞,并观察其抗原呈递功能.方法:实验于2005-05/2006-11在南方医科大学南方医院肿瘤中心生物治疗实验室完成.从人类白细胞抗原A2表达阳性的健康人外周血中分离获得单个核细胞.培养5 h后洗涤贴壁细胞,加入含有10%人AB血清的RPMI1640培养基,及重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和重组人白细胞介素4,于培养的第1,3,6天对树突状细胞的形态、表型进行分析,并定期检测树突状细胞的纯度与得率.抽取与以上树突状细胞不同来源的其他健康人外周血.经淋巴细胞分离液分离后,获取非贴壁细胞,用含10%人AB血清的1640培养基重悬,加入白细胞介素2继续孵育6 d,作为同种异体T淋巴细胞.将树突状细胞分为两组,一组按常规方法培养6 d,另一组在培养至第5天时加入黑色素瘤抗原基因A3编码的多肽继续培养24 h.在经紫外线处理后的96孔板中,分别加入树突状细胞悬液1×104,5×103,2×103,1×103细胞/每孔,以自身T淋巴细胞作为对照,每孔设3个复孔,分别加入1×105淋巴细胞/每孔.评价树突状细胞刺激T淋巴细胞增殖的能力.结果:①单个核细胞体外培养至第6天,可获得大量、90.81%高纯度的树突状细胞,能够较高地表达21.8%CD1a、99.0%HLA-DR、63.4%CD80、18.9%CD83和80.6%CD86.②将诱导培养6 d获得的两组树突状细胞作为刺激细胞,以不同的浓度与同种异体淋巴细胞混合,均可产生增殖反应;经过黑色素瘤抗原基因A3编码的多肽处理的各种比例的树突状细胞,较相应未经黑色素瘤抗原基因A3编码的多肽处理的树突状细胞激发淋巴细胞增殖的能力明显增强,浓度相对较高的树突状细胞刺激效果最明显,能够强烈地激发同种混合淋巴细胞增殖.结论:得到了一群较高程度表达CD83、CD86和HLA-DR分子、体外可强烈激发同种异体T淋巴细胞增殖的树突状细胞群.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	罗荣城	南方医科大学南方医院肿瘤中心	287	1892	18.0	29.0
2	尤长宣	南方医科大学南方医院肿瘤中心	49	190	7.0	12.0
3	吕成伟	南方医科大学南方医院肿瘤中心	37	135	7.0	8.0
4	高伟生	南方医科大学南方医院肿瘤中心	3	5	1.0	2.0
5	马树东	南方医科大学南方医院肿瘤中心	9	27	4.0	5.0