核因子NF-κB p65亚基TAD的克隆及表达

• 作者: 侯春丽 应大君 魏勇
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 核转录因子NF-κB p65亚基转录激活区域 克隆 表达
• 年，卷（期）: 2007,（1）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 21-23
• 页数: 3页
• 分类号: R392.11|R394-33|R394.3
• 字数: 2418字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5404.2007.01.007

摘要

目的 获得NF-κB p65亚基转录激活区域(transcription activation domain,TAD),构建真核表达载体并在内皮细胞中检测其表达.方法 培养人脐静脉内皮细胞,提取总RNA,经RT-PCR得到p65 TAD基因片段,测序正确后插入带有绿色荧光蛋白的真核表达载体pEGFP-N1,构建表达载体pEGFP-N1-p65 TAD,然后转染内皮细胞,荧光显微镜下观察表达情况,同时用Western blot分析蛋白的表达.结果 有效地扩增了p65 TAD 783 bp的目的基因片段.酶切结果表明所构建的含p65 TAD基因的质粒与设计相同.p65 TAD在脐静脉内皮细胞中得到了高效的表达.结论 成功地构建了p65 TAD的真核表达载体并实现了在内皮细胞中的高效表达.