不同细胞因子组合对体外培养人脐带血造血干细胞的扩增效果

• 作者: 刘云霞 刘立新 孟杰 徐大为 王庆林 郭亚春
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 造血干细胞 胎血 细胞因子类 基因扩增
• 年，卷（期）: 2007,（3）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 401-404
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 6007字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2007.03.001

摘要

目的:观察细胞因子对培养的人脐带血造血干细胞的扩增效果,寻求体外最佳细胞因子组合.方法:实验于2002-06/2004-04在承德医学院基础研究所及承德医学院附属医院中心实验室完成.①以足月顺产健康新生儿的脐带血(由承德医学院附属医院妇产科提供,新生儿家属均签署实验知情同意书)作为实验标本.无菌条件下平均采血量30～60 mL,梯度离心分离脐带血单个核细胞.②细胞体外扩增DMEM培养体系(含体积分数0.2的胎牛血清)为0.25 μg/L干细胞因子,0 25 μg/L白细胞介素3,0.5 μg/L白细胞介索6,0.25 μg/L粒-巨噬细胞集落刺激因子,0.8 μg/L粒细胞集落刺激因子,0.05 μg/L血小板生成素,0.8μg/L FLt-3配基.此7种细胞因子及剂量按不同组合分为6组:干细胞因子+白细胞介素3+白细胞介素6组、干细胞因子+白细胞介素3+白细胞介素6+粒-巨噬细胞集落刺激因子组、干细胞因子+白细胞介素3+白细胞介素6+粒细胞集落刺激因子组、干细胞因子+白细胞介素3+白细胞介素6+粒-巨噬细胞集落刺激因子+粒细胞集落刺激因子组、干细胞因子+白细胞介素3+白细胞介素6+血小板生成素+FLt-3配基组、干细胞因子+血小板生成素+FLt-3配基组.各组单个核细胞终浓度为1×108个L-1.③培养第7,14,21天进行细胞形态学观察;培养第0,5,10,14,18,21天观察不同细胞因子组合对脐带血干细胞扩增的效果;应用流式细胞仪对培养前后细胞表面标志CD34+进行检测.结果:①脐带血干细胞形态学观察结果:体外培养第14天,细胞胞体小,胞浆量少,胞核体积大,多不规则,为早期造血干细胞.②细胞体外扩增培养情况:应用干细胞因子+白细胞介素3+白细胞介素6+血小板生成素+FLt-3配基这一细胞因子组合,脐带血干细胞可保持＞98%的细胞存活率;培养第7天出现典型早期造血干细胞,第21天细胞总数达到高峰(F=60.228,P＜0.01).③细胞表面标志CD34+的动态变化:干细胞因子+白细胞介素3+白细胞介素6+血小板生成素+FLt-3配基这一细胞因子组合为生长刺激剂,应用后体外培养的造血干细胞于第14天达高峰,与培养前比较差异有显著性意义(F=20.782,P均＜0.01),之后逐渐下降.结论:应用干细胞因子+白细胞介素3+白细胞介素6+血小板生成素+FLt-3配基细胞因子组合可长期维持脐带血干细胞的体外生长,且体外培养第14天是临床移植的最佳时机.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘云霞	承德医学院基础部	12	80	6.0	8.0
2	徐大为	承德医学院基础部	22	48	5.0	5.0
3	郭亚春	承德医学院基础部	59	264	9.0	14.0
4	刘立新	承德医学院基础部	19	37	4.0	5.0
5	王庆林	湖南师范大学医学部免疫教研室	30	117	6.0	9.0
6	孟杰	承德医学院附属医院神经外科	26	122	6.0	10.0