摘要:
背景:线粒体是细胞内主要耗氧部位,是产生自由基的主要场所,也是内源性自由基攻击的靶部位,其结构和功能会随着年龄的增加而改变,逐步导致全身性生理功能下降.马齿苋(Portulaca oleracea L.)有长寿菜之称,营养丰富,又有抗自由基作用,其抗衰老作用是否与心肌线粒体的保护有关值得探讨.目的:观察马齿苋水提液对衰老模型小鼠心肌线粒体磷脂的脂质过氧化和呼吸链酶活性的影响,分析其心肌保护作用途径.设计:完全随机分组设计,对照动物实验.单位:佳木斯大学基础医学院生化教研室.材料:①于2004-01/08在佳木斯大学实验动物中心完成动物饲养和实验,在生物化学教研室完成动物的处死、心脏取材、线粒体的制备,在生物化学教研室、大学实验中心、化学与药学院完成指标的测定.选用成年纯系昆明种健康小白鼠30只,雌雄不拘.②按随机摸球法分为3组:青年对照组8只,衰老模型组和模型给药组各11只.③马齿苋由佳木斯市中医药研究所提供,本校生药教研室鉴定,制成含生药浓度1 kg/L水提液.心磷脂标准品由美国Sigma公司提供;丙二醛、Ca2+-ATP酶活性测定试剂盒由南京建成生物工程研究所提供.方法:①衰老模型组每日颈背部皮下注射D-半乳糖100 mg/kg;马齿苋多糖组除注射D-半乳糖外,同时按含生药13 g/(kg·d)灌服马齿苋水提液;青年对照组每日皮下注射等容量的生理盐水.连续给药30 d,于最后一次给药次日处死,迅速取心脏,备用.②参考南京建成生物工程研究所提供的方法制备线粒体.按试剂盒说明测定线粒体内丙二醛含量及Ca2+-ATP酶活性;采用高效液相色谱法测定线粒体膜磷脂中心磷脂相对含量;采用伍期专的方法测定复合体Ⅰ及复合体Ⅱ+Ⅲ活性.③计量资料差异比较采用方差分析和t检验.主要观察指标:各组小鼠心肌线粒体膜磷脂组成、线粒体丙二醛含量及复合体Ⅰ、复合体Ⅱ+Ⅲ和Ca2+-ATP酶活性比较.结果:小鼠30只均进入结果分析.①心肌线粒体内丙二醛含量:衰老模型组为(8.827±0.873)μmol/g,高于青年对照组和马齿苋组[(5.194±0.674),(5.901±0.743)μmol/g,t=7.48,7.22,P<0.01].②心肌线粒体内心磷脂相对含量及Ca2+-ATP酶活性:衰老模型组分别为(0.156±0.012)mg/g,(1.267±0.167)μkat/g,低于青年对照组和马齿苋组[心磷脂:(0.190±0.022),(0.184±0.021)mg/g;Ca2+-ATP酶:(1.870±0.254),(1.780±0.237) μkat/g,t=3.23,5.61,P<0.05~0.01].③心肌线粒体内复合体Ⅰ和复合体Ⅱ+Ⅲ活性:衰老模型组分别为(3.517±0.383),(20.217±2.200)μkat/g,低于青年对照组和马齿苋组[复合体Ⅰ:(6.817±0.600),(6.067±0.750)μkat/g;复合体Ⅱ+Ⅲ:(56.400±4.933),(51.800±4.217)μkat/g,t=5.74,9.86,P<0.01].结论:马齿苋水提液可能通过抑制心肌线粒体磷脂的脂质过氧化和改善呼吸链酶的活性而实现对线粒体的保护作用.