冻存复苏条件对髓性白血病细胞株生物学特性的影响

• 作者: 侯毅鞠 李艳 袁忠海 郭素红
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 细胞培养 复苏 HL60
• 年，卷（期）: 2007,（24）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 4714-4717
• 页数: 4页
• 分类号: R733.7
• 字数: 5329字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2007.24.016

摘要

目的:采用不同方法对白血病HL60细胞株进行冻存和复苏,观察生物学特性改变,筛选最佳冻存复苏方案.方法:实验于2006-04/06在吉林医药学院临床检验实验室(国家三级标准)进行.①HL60细胞株由中国科学院上海生物细胞研究所提供.将欲冷冻保存的HL60细胞调整到良好的生长状态(对数生长期),随机数字表法分成4组,离心收集后在含体积分数为0.1小牛血清的RPMI-1640培养基中分别加入二甲基亚砜,使其终浓度依次为50,100,150,200 g/L.冻存15 d后,每组取1支冻存管复苏并接种于细胞培养板,培养12 h后用锥虫蓝拒染法计算细胞复苏率.②选择冻存条件和冻存细胞密度相同的两支冻存管,按不同方法进行HL60细胞复苏.37 ℃水浴传统复苏法:立即将冻存管置于37 ℃水浴中,待融化后800 r/min离心5 min,吸去上清液,加入含体积分数为0.1小牛血清的RPMI-1640培养基,混匀后接种于细胞培养板,1 mL/孔,9孔/组,置于体积分数为0.05的CO2培养箱37 ℃继续培养.40 ℃溶解后再37 ℃恒温改良复苏法:将冻存细胞于40 ℃水浴中迅速溶解,转入37 ℃水浴箱,融化后离心、加培养基等操作同传统复苏法.复苏细胞培养12 h后采用锥虫蓝染色计算细胞存活率.③用无血清RPMI-1640培养基制备HL60细胞悬液,按3×107 L-1密度接种于细胞培养板中,1 mL/孔,然后分别加入体积分数为0.05,0.1,0.12,0.15,0.2的灭活小牛血清,每种血清浓度设置8个试验孔,并分别于培养12,24,36,48,60,72,84,96 h后计数每孔细胞数量,并绘制细胞生长曲线.结果:①不同浓度二甲基亚砜冻存后HL60细胞复苏率的比较:二甲基亚砜200 g/L组的细胞复苏率明显低于二甲基亚砜50,100,150 g/L组[(64.6±2.8)%,(87.0±1.4)%,(86.4±2.1)%,(85.7±2.8)%;t=25.44,P＜0.01],二甲基亚砜50,100,150 g/L组间差异无显著性意义(t=0.82～1.44,P＞0.05).②不同复苏方法HL60细胞存活率的比较:与37 ℃水浴传统复苏法比较,40 ℃溶解后再37 ℃恒温改良复苏法的细胞存活率显著升高[(69.5±1.5)%,(87.4±1.8)%,t=23.24,P＜0.01].③RPMI-1640培养基不同血清含量对HL60细胞生长情况的影响:在体积分数为0.05的血清含量培养基中,HL60细胞基本不生长,且有逐渐死亡的趋势;在体积分数为0.1的血清含量培养基中,HL60细胞生长趋势明显,但生长速度相对较慢;在体积分数为0.12,0.15,0.2的血清含量培养基中,HL60细胞生长迅速,3种血清浓度间细胞生长趋势无明显差异.结论:以50 g/L二甲基亚砜作为HL60细胞冻存保护剂、联合40 ℃溶解后再37 ℃恒温改良复苏法可使细胞保持最佳生物学特性,体积分数为0.12的血清含量为HL60细胞常规培养的最适浓度.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李艳	吉林医药学院临床检验教研室	73	133	6.0	9.0
2	侯毅鞠	吉林医药学院临床检验教研室	21	103	6.0	9.0
3	郭素红	吉林医药学院临床检验教研室	18	67	5.0	7.0
4	袁忠海	吉林医药学院临床检验教研室	19	100	6.0	9.0