壳聚糖-小干扰RNA纳米粒对U251细胞增殖及凋亡的影响

• 作者: 周振军 姚鹏飞 柯以铨 王建奇 许刚
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 壳聚糖 纳米粒 胶质瘤 端粒酶反转录酶 RNA干扰 生物材料
• 年，卷（期）: 2008,（14）
• 所属期刊栏目: 研究与报告
• 页码范围: 2640-2644
• 页数: 5页
• 分类号: R318
• 字数: 5517字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2008.14.012

摘要

目的:预防胶质瘤术后复发采取化学疗法和放射治疗,因敏感性低及胶质瘤对其产生抵抗,并未提高恶性胶质瘤患者的预后.目前广泛开展的基因治疗研究,有望取得突破.观察靶向端粒反转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)基因的壳聚糖(chitosan,CS)- 小干扰RNA(small interferening RNA,siRNA)纳米粒在体外进行RNA干扰对胶质瘤U251细胞增殖及凋亡的影响.方法:实验于2006-09/2007-07在广东省神经外科研究所(重点实验室)完成.制各针对hTERT基因的CS-siRNA纳米粒,原子力显微镜观察纳米粒的形态及大小.按转染试剂的不同分为8组.空白对照组(不含转染试剂及siRNA),阳性对照组(LipofectamineTM 2000转染siRNA),阴性对照组(含30 nmol/L阴性对照siRNA的纳米粒),裸siRNA对照组(含30 nmol/L siRNA),空白CS纳米粒对照组,10,30,90 nmol/L siRNA纳米粒组.取对数生长期的U251细胞转染后,采用CCK-8法绘制细胞增殖曲线并计算抑制率;Hoechst 33342/碘化丙啶双荧光染色后,荧光显微镜下观察细胞核形态;流式细胞仪检测细胞周期;反转录-聚合酶链反应法检测hTERT-mRNA表达变化.结果:①原子力显微镜下CS-siRNA纳米粒,呈球形,形状一致,大小约87 nm.②阳性对照组、30,90 nmol/L siRNA纳米粒组细胞增殖明显受抑制,与其余各组比较差异有显著性(P＜0.05).③Hoechst 33342/碘化丙啶双染荧光显微镜下可见空白对照组、阴性对照组、裸siRNA对照组和空白CS纳米粒对照组大多为低蓝色的正常细胞;阳性对照组、10,30,90nmol/L siRNA纳米粒组以高蓝色的凋亡细胞为主.④阳性对照组、10,30,90 nmol/L siRNA纳米粒组与空白对照组、阴性对照组、裸siRNA对照组、空白CS纳米粒对照组相比,G0/G1期细胞显著增加,S期细胞明显减少,阳性对照组最为明显(P＜0.05),G2/M期细胞变化不明显(P＞0.05).⑤阳性对照组、10,30,90 nmol/L siRNA纳米粒组hTERT mRNA表达明显下调,30,90 nmol/L siRNA纳米粒组表达下调较10 nmol/L siRNA纳米粒组更明显.结论:CS-siRNA在体外明显抑制了胶质瘤U251细胞增殖并促进其凋亡.