用两种ELISA方法快速检测大菱鲆细菌性出血性败血症的病原菌

• 作者: 丁鉴锋 刘永波 孙岑 李艳 王斌 范薇
• 来源期刊: 大连水产学院学报
• 学科: 农学
• 关键词: 大菱鲆出血性败血症 迟钝爱德华氏菌 19接ELISA技术 竞争ELISA技术
• 年，卷（期）: 2008,（4）
• 页码范围: 252-257
• 页数: 6页
• 分类号: S943
• 字数: 5694字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-9957.2008.04.002

摘要

以大菱鲆 Scophthalmusmaximus 出血性败血症病原菌迟钝爱德华氏菌 Edwardsiella tarda 为抗原,从免疫家兔体内获得高免疫血清,建立快速检测大菱鲆出血性败血症病原迟钝爱德华氏菌的间接ELISA技术.采用棋盘滴定法确定间接ELISA抗原和抗血清的最适工作浓度分别为107个/mL和1:20 000;最低检测菌浓度为104个/mL;抗血清与其他细菌标准菌株的交叉反应结果均为阴性,表明该方法具有较高的特异性.将该方法优化后检测了19尾人工感染出血性败血症并发病的大菱鲆和19尾健康的大菱鲆,阳性检测率分别为89.5%和的10.5%.同时在间接 ELISA 方法的基础上建立竞争 ELISA 检测技术,结果表明:理想的包被抗原浓度为107个/mL,兔抗血清的工作浓度为1:20 000,酶标抗体工作浓度为1:1 000,可测最适范围为2×105～2 X 108个/mL,最低检测菌浓度为2 X 105个/mL,得到回归方程y=-0.3811x+2.2335,R2=0.992.