猪繁殖与呼吸综合征病毒NJ-a株ORF6基因的表达及特异性抗体的制备

• 作者: 于春梅 曹瑞兵 李鹏 杨瑞锋 毕志香 郑其升 陈溥言
• 来源期刊: 南京农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒NJ-a株 ORF6基因 原核表达 抗体制备
• 年，卷（期）: 2008,（2）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 154-158
• 页数: 5页
• 分类号: S852.4+3
• 字数: 3484字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-2030.2008.02.032

摘要

根据GenBank公布的猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)VR2332 株的核酸序列设计并合成1对特异性引物,用RT-PCR方法扩增PRRSV NJ-a株ORF6基因,将其连接入pMD18-T载体,经测序后克隆入原核表达载体pET-32a(+)上,构建原核表达载体pET-ORF6.阳性质粒转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),经异醛-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,PRRSV ORF6基因获得表达.以纯化的重组蛋白为抗原免疫家兔3次,获得抗PRRSV NJ-a株M蛋白的特异抗体.经Western-blotting证明,该多克隆抗体既能与原核表达的重组M蛋白发生反应,又能与PRRSV发生特异性反应;间接免疫荧光结果表明,获得的多克隆抗体与表达PRRSV M蛋白的293T细胞及感染PRRSV的Marc-145细胞发生反应.兔抗PRRSV NJ-a株M蛋白特异性抗体的获得,为进一步研究PRRSV M蛋白的表达和功能奠定了基础.