猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株ORF6基因的克隆与原核表达研究

• 作者: 刘月焕 刘永宏 张永富 张秋雨 杨龙峰 林健 王凤龙 王金玲 赵丽 韩春华
• 来源期刊: 中国动物检疫
• 学科: 农学
• 关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒 变异株 ORF6基因 克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2009,（7）
• 所属期刊栏目: 试验研究
• 页码范围: 29-32
• 页数: 4页
• 分类号: S852.659.6
• 字数: 4446字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2009.07.017

摘要

根据GenBank中美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的ORF6基因序列,设计合成一对特异性引物,应用RT-PCR方法扩增出PRRSV的ORP6基因(M基因).将所扩增片段克隆入原核表达载体pET-32a(+),pET-ORF6重组质粒转化DH5a宿主菌后,经双酶切、PCR鉴定后挑选阳性克隆测序鉴定并对插入的ORF6基因序列进行分析.结果表明,ORF6基因的原核表达载体构建成功.ORF6基因推导的氨基酸与美洲型相应基因的同源性为96.0%～100%,与LV株的同源性为79.9%,系统进化树表明该PRRSV属于美洲型.将构建成功的重组质粒pET-0RF6转化BL21,诱导后经SDS-PAGE和Western-blot分析表明:克隆在HIS标签的膜基质蛋白基因与HIS获得了高效表达,表达的融合蛋白HIS-M分子量约为39kDa,并且有免疫学反应活性.