猪繁殖与呼吸综合征病毒HBKM2株ORF7基因的克隆、序列分析及原核表达

• 作者: 伍锐 余爱冬 刘泽文 唐文娟 徐涤平 杨克礼 梁望旺 段正赢 熊忠良 邓均华
• 来源期刊: 安徽农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 猪繁殖与呼吸综合症病毒 核衣壳蛋白 ORF7基因 克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2009,（35）
• 所属期刊栏目: 农业生物技术
• 页码范围: 17406-17408
• 页数: 3页
• 分类号: S828
• 字数: 2718字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0517-6611.2009.35.044

摘要

[目的]对猪繁殖与呼吸综合征病毒HBKM2毒株核蛋白编码基因ORF7进行研究,为进一步了解其编码蛋白的功能和研制新的血清学诊断方法奠定基础.[方法]采用RT-PCR方法扩增HBKM2株的ORF7基因,然后利用DNA Star软件包对克隆的序列进行序列分析,将ORF7基因克隆到大肠杆菌原核表达载体pGEX-KG上,构建重组表达质粒pKG-N.将重组质粒转化到大肠杆菌BL21,并经IPTG诱导表达,最后利用Western-blot对表达蛋白的免疫反应活性进行鉴定.[结果]HBKM2毒株的ORF7基因长约372 bp;序列分析表明与高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒的同源性达99%以上;SDS-PAGE表明克隆的ORF7基因在大肠杆菌中获得了高效融合表达;Western-blot分析表明,重组蛋白GST-N能够与PRRSV高免猪血清发生特异性的免疫反应.[结论]成功地扩增了ORF7基因,且GST-N融合蛋白能在大肠杆菌中高效表达.