猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7基因原核表达载体的构建及序列分析

• 作者: 刘月焕 刘永宏 刘锋 张永富 张秋雨 李明刚 马国文
• 来源期刊: 中国动物检疫
• 学科: 农学
• 关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF7基因 原核表达载体
• 年，卷（期）: 2008,（12）
• 所属期刊栏目: 试验研究
• 页码范围: 25-27,30
• 页数: 4页
• 分类号: S852.659.6
• 字数: 4643字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2008.12.013

摘要

根据GenBank中美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF7基因序列,设计合成一对引物,应用RT-PCR方法扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的ORF7基因(N基因).将所扩增片段克隆入原核表达载体pET-32a(+),pET-ORF7重组质粒转化DH5a宿主菌后,经双酶切、PCR鉴定后挑选阳性克隆测序鉴定并对插入的ORF7基因序列进行分析.结果表明,ORF7基因的原核表达载体构建成功.ORF7基因序列与美洲型的ORF7基因核苷酸同源性为92.8%～99.7%,与LV株的相应基因核苷酸同源性为65.3%:推导的氨基酸与美洲型相应基因的同源性为92.0%～99.2%,与LV株的同源性为65.3%.系统进化树表明该PRRSV属于美洲型.本研究为N蛋白的进一步研究和制备诊断性抗原奠定了基础.