猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7基因的克隆、高效表达与鉴定

• 作者: 刘霞 吴斌 张瑞 张秀云 肇慧君 贾赟
• 来源期刊: 大连工业大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 核衣壳蛋白基因(ORF7) 基因克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 页码范围: 18-22
• 分类号: Q786
• 字数: 2822字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-1404.2011.01.005

摘要

根据猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)VR2332株ORF7的全长基因序列设计一对特异性引物,应用RT-PCR扩增出完整的ORF7基因,并将PCR产物克隆至pMD-18T载体进行测序分析.双酶切测序后重组质粒pMD-18T-N得到目的片段连接至原核表达载体pET-28a(+)上,构建重组质粒pET-28a(+)-N.再转化至BL21宿主菌,对诱导表达条件(IPTG质量浓度、诱导时间、诱导温度)进行优化.结果显示,在37 ℃、0.2 mmol/L IPTG诱导5 h可实现重组N蛋白的高效表达.该重组N蛋白经Ni-NTA亲和层析柱纯化后,Western-blotting分析显示,重组的N蛋白与PRRSV阳性血清发生特异性反应,表明表达的重组N蛋白具有较好的反应活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴斌		59	317	10.0	15.0
2	贾赟		33	159	7.0	11.0
3	肇慧君		20	52	4.0	6.0
4	张瑞	河南农业大学牧医工程学院	14	71	5.0	8.0
5	张秀云	大连工业大学生物工程学院	2	3	1.0	1.0
6	刘霞		1	1	1.0	1.0