人抗凝血酶Ⅲ基因转染血管内皮样细胞的表达

• 作者: 任华 刘晓峥 韩志军
• 来源期刊: 中国胸心血管外科临床杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 骨髓间充质干细胞 血管内皮样细胞 基因修饰 组织工程化血管 再狭窄
• 年，卷（期）: 2008,（6）
• 所属期刊栏目: 基础研究论著
• 页码范围: 438-443
• 页数: 6页
• 分类号: R813.1
• 字数: 5329字
• 语种: 中文

摘要

目的 观察人抗凝血酶Ⅲ(human antithrombin-Ⅲ,hAT-Ⅲ)基因转染血管内皮样细胞(VELCs)后的表达情况. 方法 体外分离、培养和扩增的人骨髓间充质干细胞(BMMSCs),定向诱导分化产生血管内皮样细胞,然后将血管内皮样细胞随机分为实验组和对照组,实验组采用脂质体转染方法,将携带hAT-Ⅲ基因的质粒DNA转染血管内皮样细胞,分别于转染后72h、96h,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫组织化学法、蛋白免疫印迹法(Western-Blotting)和发色底物法检测细胞hAT-Ⅲ的表达;对照组细胞采用空白TE缓冲液代替质粒DNA,其余方法完全同实验组. 结果 RT-PCR显示实验组细胞扩增出hAT-Ⅲ特异片段,对照组阴性;免疫组化显示实验组细胞阳性表达hAT-Ⅲ,对照组阴性;Western-Blotting显示实验组细胞培养上清液中有hAT-Ⅲ特异条带,对照组阴性; 发色底物法检测显示实验组细胞hAT-Ⅲ活性为9.50%±1.52%,对照组为1.83%±1.17%,两组比较差异有统计学意义(t=7.910,P<0.01). 结论 hAT-Ⅲ基因可以成功转染血管内皮样细胞并进行表达.