多枝赖草基因组可转化人工染色体(TAC)文库的构建和鉴定

• 作者: 周玉雷 宋琳琳 张艳 徐粤宇 赵茂林
• 来源期刊: 中国科学C辑
• 关键词: 多枝赖草(Leymus multicaulis) Mb级DNA 可转化人工染色体(TAC) 基因组文库
• 年，卷（期）: 2008,（4）
• 所属期刊栏目: 论文
• 页码范围: 328-336
• 页数: 9页
• 语种: 中文

摘要

为了克隆和转化多枝赖草(Leymus multicaulis)的耐黄矮病、耐蚜虫、耐干旱、耐盐碱等抗逆性基因,利用脉冲电泳分离纯化2 Mb以上核DNA,酶切后回收10～200 kb DNA片段按大小分5组与TAC载体连接后电转化导入细菌DH10B,在卡那霉素和蔗糖选择压下均有阳性克隆.用两种TAC载蘰YLTAC17和pYLTAC747H/sacB分别构建了文库Ⅰ和Ⅱ,约16.5和23.6万个克隆,估计覆盖3～5倍多枝赖草基因组大小.文库以混合克隆形式保存在12×2块深孔96孔板中,每孔1.2mL菌液中含300～600个克隆,40多万个克隆转存到3块384孔板,留24个孔存叶绿体和线粒体DNA探针菌液,可用于后续文库鉴定.此外,从文库Ⅰ和Ⅱ分别挑取2501和2890个单克隆存于14块384孔板中.17块384孔板都用GeneTACTMMG3复制了2份,点高密度杂交膜6张,以多枝赖草谷胱甘肽还原酶基因5'RACE-GR和3RACE-GR为探针初步筛选到19个阳性克隆.两文库为多枝赖草抗性基因的克隆、物理图谱的构建、功能验证等基因组有关研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐粤宇		9	24	2.0	4.0
2	张艳		19	174	9.0	13.0
3	宋琳琳		27	106	6.0	9.0
4	赵茂林		27	353	12.0	18.0
5	周玉雷		18	70	5.0	7.0