实时荧光定量聚合酶链反应测定表皮生长因子Ⅲ突变体表达的方法构建及其应用

• 作者: 常惠玉 张行 曹江 杨蓓蓓 陈嘉
• 来源期刊: 中华耳鼻咽喉头颈外科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 受体,表皮生长因子 质粒 聚合酶链反应 喉肿瘤 癌,鳞状细胞
• 年，卷（期）: 2008,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 296-301
• 页数: 6页
• 分类号: R76
• 字数: 5713字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-0860.2008.04.012

摘要

目的 构建含有表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(epidermal growth factor receptor variantⅢ,EGFRv Ⅲ)的重组质粒,建立实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术测定EGFRv Ⅲ的标准曲线,以定量检测喉鳞癌组织中EGFRv Ⅲ的表达水平.方法以重叠延伸PCR法构建含EGFR第1外显子及第8至部分第9外显子的融合序列.再以融合序列为模板,以高特异性的引物扩增EGFRv Ⅲ的目的片段,构建含有EGFRv Ⅲ的重组质粒,进行测序鉴定.将此质粒作为标准品进行梯度稀释,以TaqMan探针实时荧光定量PCR进行检测,建立标准曲线.并以此技术对32例喉鳞癌组织中EGFRvⅢ mRNA表达水平进行测定.结果 经测序鉴定,含EGFRv Ⅲ的重组质粒标准品构建成功,以不同稀释水平的标准品质粒进行荧光定量PCR扩增所得的标准曲线,可用于EGFRv Ⅲ定量分析.32例喉鳞癌组织中共有5例检测到EGFRv Ⅲ的表达,阳性率为15.6%.除1例癌旁组织中存在极少量的EGFRv Ⅲ表达外,EGFRv Ⅲ均在肿瘤组织中表达.结论 用TaqMan探针实时荧光定量PCR技术定量研究EGFRv Ⅲ的方法已构建成功,在喉癌组织中的成功运用已证明该方法切实可行,并且较为准确可靠.EGFRv Ⅲ在喉癌组织中有表达,但是阳性率及含量不高,是否能成为喉癌生物治疗的特异性攻击靶点尚待进一步探索.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张行	浙江大学医学院附属邵逸夫医院临床医学研究所中心实验室	47	286	10.0	15.0
2	曹江	浙江大学医学院附属邵逸夫医院临床医学研究所中心实验室	49	217	8.0	12.0
3	杨蓓蓓	浙江大学医学院附属二院耳鼻咽喉科	49	286	9.0	15.0
4	陈嘉	浙江大学医学院附属二院耳鼻咽喉科	3	12	1.0	3.0
5	常惠玉	浙江大学医学院附属二院耳鼻咽喉科	5	4	1.0	2.0