表皮葡萄球菌基因删除突变株构建方法的研究

• 作者: 吴旸 娄强 朱于莉 朱涛 王家学 瞿涤
• 来源期刊: 微生物与感染
• 学科: 医学
• 关键词: 基因删除 pMAD pBT2 表皮葡萄球菌 双组分信号转导系统
• 年，卷（期）: 2008,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 11-16
• 页数: 6页
• 分类号: R3
• 字数: 4363字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-6184.2008.01.005

摘要

目的 探讨高效的表皮葡萄球菌基因删除突变株构建方法.方法 分别应用2种不同的穿梭质粒pMAD和pBT2,连接目的基因表皮葡萄球菌双组分信号转导系统arlS、saeRS和lytS的上下游片段,构建重组质粒,电转入金黄色葡萄球菌RN4220后转入表皮葡萄球菌1457,利用抗性和生物标志筛选出针对特定目的基因的突变株SE1457-△arlS、SE1457-△saeRS和SE1457-△lytS,比较2种方法的优、缺点.结果 利用pMAD和pBT2分别构建基因删除同源重组质粒pMAD-△saeRS、pBT2-△arlrlS和pBT2-AlytS,并均获得相应的表皮葡萄球菌基因删除突变株.在筛选过程中,以pMAD为载体构建基因删除突变株,仅需1轮抗性/蓝白斑筛选过程即获突变株;而以pBT2为载体构建基因删除突变株筛选方法,需经过5～10轮的筛选才可获得突变株.基因删除突变株经聚合酶链反应(PCR)和测序等鉴定确认.与野生株相比,SE1457-△arlS突变株的生物膜形成能力降低90.96%,而SE1457-△saeRS和SE1457-△lytS株的生物膜形成能力略有增加.结论 以pMAD载体构建表皮葡萄球菌突变株比较快速和简便.