艾滋病患者APOBEC3G基因的克隆和真核表达

• 作者: 卢洪洲 张云智 江雪艳 王珍燕
• 来源期刊: 微生物与感染
• 学科: 医学
• 关键词: APOBEC3G 真核表达 艾滋病
• 年，卷（期）: 2008,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 219-223
• 页数: 5页
• 分类号: R5
• 字数: 4338字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-6184.2008.04.007

摘要

目的 建立艾滋病(AIDS)患者载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3G(APOBEC3G)的真核表达体系.方法 采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术从AIDS患者外周血单个核细胞(PBMC)中获取APOBEC3G基因编码区,将其克隆到pMD18-T载体上,测序验证正确后再将其转接入真核表达载体pEGFP-N1中,然后将重组质粒pEGFP-N1-A3G转染HEK293T细胞,分别用RT-PCR法和蛋白印迹法(Western印迹法)验证APOBEC3G在mRNA和蛋白水平的表达.结果 从AIDS患者体内克隆的APOBEC3G基因编码区长度为1 154 bp,测序结果与GenBank中APOBEC3G参考序列(NM021822)比对发现存在2处差异,分别位于mRNA第588位和746位碱基处.重组质粒pEGFP-N1-A3G转染HEK293T细胞,在荧光显微镜下观察到融合蛋白A3G-EGFP的表达,RT-PCR法和Western blot法分别验证了蛋白在mRNA和蛋白水平的表达.结论 成功构建了AIDS患者APOBEC3G蛋白的真核表达体系,为进一步研究APOBEC3G在HIV-1感染中的作用奠定了基础.