监测活细胞中诱导激活的Rac、Cdc42信号转导通路的FRET单分子探针

• 作者: 任道全 刘如石 孙斌 张青岩 邱义兰 郭向荣
• 来源期刊: 分子细胞生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: FRET 单分子探针 Rac1 Cdc42 诱导激活
• 年，卷（期）: 2008,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 349-358
• 页数: 10页
• 分类号: Q2
• 字数: 6005字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-520X.2008.05.002

摘要

Rho家族鸟苷三磷酸酶.包括Rac1和Cdc42等,参与调节细胞形态、细胞迁移、转录激活和基因表达等一系列细胞过程.根据FRET(Fluorescent resonance energy transfer)技术原理,构建了包含红色荧光蛋白dsRed1与青色荧光蛋白ECFP的全长cDNA,效应分子Pak1或N-WASP的GTP酶联结区域,信号分子Rac1或Cdc42的全长cDNA的几种单分子探针.转染NIH3T3或Hela细胞,以胰岛素、缓激肽为诱导剂,分别激活Rac1、Cdc42信号转导通路.离体荧光光谱检测表明,在两种转染动物细胞中均产生了FRET现象.不同信号转导通路的FRET效率,在诱导激活5min后,均达到最高值,但增加幅度有显著差异.随着诱导时间的延长,FRET效率下降,但下降速率在不同信号转导通路间差异显著.Rac1、Cdc42激活试验证实,诱导激活的转染细胞中.Rac1、Cdc42均处于激活状态(GTP-bound),其在不同诱导时间的相对激活程度与FRET效率表现相同.诱导激活的Rac1、Cdc42信号转导通路,分别导致了转染活细胞中片状伪足、线状伪足的产生.这表明,采用这些单分子探针,可直接监测激活的信号转导通路,在活细胞中的3D时空分布变化图像及其产生的细胞学效应.采用这些单分子探针,分析、判断了一些调节蛋白对Rac1、Cdc42的GEF或GAP特性,从而提供一种可大大简化现有的鉴定待测蛋白分子的方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙斌	湖南师范大学生命科学学院	3	3	1.0	1.0
2	任道全	湖南师范大学生命科学学院	3	3	1.0	1.0
3	张青岩	湖南师范大学生命科学学院	3	3	1.0	1.0
4	邱义兰	湖南师范大学生命科学学院	23	124	7.0	10.0
5	刘如石	湖南师范大学生命科学学院	34	210	8.0	13.0
6	郭向荣	湖南师范大学生命科学学院	8	35	2.0	5.0