用MTT比色法建立B型CpG ODN活性检测标准

• 作者: 万敏 于永利 刘璟 卫红飞 吴秀丽 王丽颖 王学菊 王莉
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: MTT比色法 脾细胞增生 BW006 活性
• 年，卷（期）: 2008,（1）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 69-71
• 页数: 3页
• 分类号: R392.33
• 字数: 3156字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1007-8738.2008.01.023

摘要

目的:B型CpG ODN,BW006作为疫苗佐剂已进入临床试验阶段,所以需要建立稳定、安全、简便易行的活性检测方法以控制不同批次BW006的生产质量.方法:根据BW006具有刺激人PBMC和小鼠脾细胞增生的特点,选择无放射性污染的MTT比色法作为首选检测方案.用BW006刺激BALB/c小鼠脾细胞作为筛选平台,确定如下反应条件:脾细胞用量、培养板形状、BW006浓度、培养液体积和培养时间以及如何优化MTT检测过程以提高反应灵敏度.结果:用3 mg/L BW006与96孔平底板中含100 mL/L FBS的200μL无酚红RPMI1640培养的6×105个小鼠脾细胞在37℃含50 mL/L C02孵箱中共孵育36 h.随后每孔弃100 μL上清,加入MTT(5 g/L)10 μL,37℃避光孵育4 h使各孔充分形成甲瓒颗粒.每孔加入DMSO 150 μL,经平板振荡器振荡20 min至颗粒完全溶解,在酶标仪上检测A578值即可.结论:建立了无污染、造价低、可操作性强的BW006活性检测方法.