间接免疫荧光检测石蜡切片中鸭肿头出血症病毒及抗原定位方法的初步建立

• 作者: 张舍郁 李传峰 汪铭书 沈婵娟 程安春
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 间接免疫荧光 鸭病毒性肿头出血症病毒 检测 抗原定位
• 年，卷（期）: 2008,（3）
• 所属期刊栏目: 兽医·资源昆虫
• 页码范围: 868-874
• 页数: 7页
• 分类号: S8
• 字数: 6628字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2008.03.033

摘要

[目的]建立间接免疫荧光(IFA)检测石蜡切片中鸭肿头出血症病毒(DSHDV)的方法,为DSHDV感染的实验室诊断、DSHDV在感染鸭组织细胞中的亚细胞定位和动态研究提供有效的检测手段.[方法]用差速离心纯化DSHDV,将纯化DSHDV免疫家兔制备兔抗DSHDV高免血清,并以DEAE-SephadexA-50柱层析纯化出兔抗DSHDV IgG,建立IFA检测石蜡切片中DSHDV的方法;利用建立的IFA对28日龄鸭人工感染DSHDV死亡鸭不同组织器官以及临床样品进行检测.应用PAGE电泳分析DSHDV基因组特性.[结果]IFA最佳条件为:切片在0.01 mol·L-1 柠檬酸(pH 6.0)缓冲液微波修复20 min后,以10%马血清37℃下封闭30 min,然后加入1:50的一抗4℃孵育过夜,最后加入1:100 FITC标记的含0.01%伊文斯蓝的二抗37℃孵育30 min.IFA检测DSHDV感染死亡鸭肝脏石蜡切片为阳性,而检测鸭瘟、禽流感病毒(H5N1)、鸭病毒性肝炎、鸭疫里默氏杆菌感染死亡鸭肝脏石蜡切片为阴性.IFA检测28日龄人工感染DSHDV死亡鸭的不同组织器官,心、肝、脾、胰、肺、肾、法氏囊、食管、气管、胸肌、胸腺、十二指肠、空肠、回肠、盲肠和直肠为阳性;哈德氏腺、脑、皮肤、腺胃为阴性.阳性组织中病毒抗原主要分布在细胞浆.经甲醛固定保持1～6年的临床死亡鸭的病毒分离阳性肝脏,IFA检测结果也呈阳性.DSHDV具有呼肠孤病毒特征,有10条分节段核酸,呈"334"分布.[结论]建立的检测石蜡组织切片中DSHDV抗原的IFA具有直观、特异性强的优点,应用于DSHDV在感染鸭组织细胞中的亚细胞定位具有良好效果,可用于DSHDV感染的实验室诊断、病原在鸭组织细胞中分布研究.DSHDV抗原存在感染细胞浆,肠道、肾脏、法氏囊和胸腺是DSHDV侵害的主要靶器官.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	程安春	四川农业大学动物医学院禽病防治中心	128	1214	19.0	30.0
3	汪铭书	四川农业大学动物医学院禽病防治中心	97	986	18.0	28.0
9	张舍郁	四川农业大学动物医学院禽病防治中心	2	19	2.0	2.0
10	沈婵娟	四川农业大学动物医学院禽病防治中心	1	16	1.0	1.0
11	李传峰	四川农业大学动物医学院禽病防治中心	1	16	1.0	1.0