靶向HER2的抑制胃癌细胞功能性单抗的制备和鉴定

• 作者: 冉宇靓 周转 孙立新 杨治华 胡海 赵西路 遇珑
• 来源期刊: 中国肿瘤生物治疗杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 胃癌 NCI-N87细胞系 人表皮生长因子受体-2 单克隆抗体
• 年，卷（期）: 2008,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 14-19
• 页数: 6页
• 分类号: R730.5|R735
• 字数: 4703字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2008.01.004

摘要

目的:制备可特异识别人表皮生长因子受体-2(human epidermal growth factor receptor-2,HER2)膜抗原的单克隆抗体,筛选出亲和力较高并对胃癌细胞有明显抑制作用的克隆.方法:以高表达HER2膜抗原的人胃癌细胞系NCI-N87免疫BABL/C小鼠,免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/O融合,ELISA法筛选出HER2反应阳性克隆株,活细胞免疫荧光法检测获得膜阳性克隆株,使用抗体亚型鉴定试剂盒鉴定抗体亚型,MTT法检测抗体对NCI-N87细胞增殖的抑制,采用与群司珠单抗的夹心ELISA和竞争抑制ELISA鉴定单抗结合HER2抗原的表位,免疫组化、Western blotting进一步检测抗HER2抗体在不同条件下与HER2抗原反应情况.结果:细胞融合产生1 442个单个集落的杂交瘤,重组HER2抗原ELISA筛选出HER2反应阳性克隆79株,活细胞免疫荧光检测获得较强膜阳性克隆7株,并测定其亚型,其中命名为15C15的1株属IgG1K类单抗,免疫竞争及结合实验显示15C15与群司珠人源化抗体识别不同的表位.细胞增殖筛选显示15C15能显著抑制人胃癌NCI-N87细胞的增殖,在80 μg/ml时抑制率可达34.8%.免疫组化显示15C15能识别部分石蜡包埋的HER2抗原,Western blotting显示15C15不能结合电泳条件下变性为线形结构的HER2抗原.结论:建立了高通量制备、筛选和鉴定靶向HER2抑制胃癌细胞生长的功能性单抗技术,获得1株可特异识别HER2抗原的明显抑制胃癌细胞增殖的IgG1类单抗15C15,具有人源化改造后用于治疗的应用潜力.