人干燥综合征A抗原重组体的构建及鉴定

• 作者: 于孟学 倪安平 刘音 朱立平 李倩 李永哲 林嘉友 甘晓丹 高扬
• 来源期刊: 医学研究杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人干燥综合征A抗原 cDNA克隆 重组体
• 年，卷（期）: 2008,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 47-49
• 页数: 3页
• 分类号: R5
• 字数: 2810字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-548X.2008.02.018

摘要

目的 克隆人干燥综合征A抗原基因(SSA-52kD),为SSA抗原的表达和使用重组抗原用于自身抗体的临床检测奠定基础.方法 根据GenBank中检索到的人SSA-52kD cDNA序列,在5'非编码区和3'非编码区设计特异性引物,提取人源Hela细胞总RNA作为模板,反转录RT-PCR扩增人干燥综合征SSA-52kD抗原cDNA.PCR产物纯化后连接至载体PET30a,导人大肠杆菌DH5α,构建重组质粒PET-30a-SSA-52kD.对重组质粒进行酶切鉴定,选择阳性克隆测序;对DNA测序结果进行鉴定分析.结果 RT-PCR扩增产物为1447bp.重组质粒PET-30a-SSA-52kD经Bgl Ⅱ和HindⅢ双酶切证实含目的基因片段.序列分析提示与GenBank中检索到的一致.结论 成功克隆人SSA-52kD基因,并构建重组质粒PET-30a-SSA-52kD.