血清乙型肝炎病毒DNA水平对HBV全基因组克隆效率的影响

• 作者: 卢建溪 朱明芬 李刚 李莉 钱师宇 陈伟
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肝炎病毒,乙型 基因组
• 年，卷（期）: 2008,（7）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1384-1389
• 页数: 6页
• 分类号: R34
• 字数: 5593字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-4718.2008.07.027

摘要

目的:通过比较血清HBV DNA水平对一片段PCR法和两片段PCR法这两种不同方法的HBV全基因组克隆效率的影响,选择出合适的HBV全基因组克隆技术,供后续的HBV的基础和临床研究.方法:采集了慢性乙型肝炎(CHB)患者85份血清,分别用本研究建立的一片段PCR法及两片段PCR法扩增HBV全基因组,经双酶切鉴定后将PCR产物克隆入载体,进行HBV全基因组序列测定.同时用实时荧光定量PCR法检测上述85份血清的HBV DNA滴度.结果:本研究建立的一片段PCR法扩增成功需要的血清HBV DNA浓度高于两片段PCR法,两种方法扩增的效率比较为:一片段PCR法扩增的阳性率低于两片段PCR法(P<0.01).一片段PCR法的保真性和灵敏度分析发现:保真性:核苷酸的人为突变率为1.13 bp/kb;灵敏度:为102个初始模板.浓度大于103的重组质粒DNA80%可以成功扩增,浓度低于该值的扩增效率比较低.结论:血清HBV DNA水平对两种扩增方法的阳性率有一定影响,滴度高低是选择合适PCR扩增方法的依据.HBV DNA滴度大于106 copies/L的样本,可选用一片段PCR法的全基因组扩增、克隆技术,而对HBV DNA滴度小于106 copies/L样本,则可选用两片段PCR法的全基因组扩增、克隆技术.本研究建立的一片段PCR法扩增HBV全基因组克隆的技术是一种值得推荐的好方法,但还需进一步优化.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李刚	中山大学附属第三医院暨南大学医学院	161	954	13.0	23.0
2	卢建溪	中山大学附属第三医院中心实验室	52	131	6.0	8.0
3	李莉	中山大学附属第三医院暨南大学医学院	50	174	7.0	10.0
4	朱明芬	中山大学附属第三医院暨南大学医学院	10	44	4.0	6.0
5	陈伟	中山大学附属第三医院中心实验室	172	694	11.0	16.0
6	钱师宇	中山大学附属第三医院感染科	1	4	1.0	1.0