乙型肝炎病毒全X基因对HEK293细胞功能的影响

• 作者: 刘红莉 刘锦锋 崔美灵 张瑜 赵英仁
• 来源期刊: 西安交通大学学报（医学版）
• 关键词: 乙型肝炎病毒(HBV) 全X基因 X基因 细胞增殖 凋亡 端粒酶活性
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 164-168
• 分类号: R512.6
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8259.2012.02.009

摘要

目的 克隆并构建乙型肝炎病毒(HBV)全X基因表达载体,探讨HBV全X基因对HEK293细胞功能的影响,并比较HBV全X基因与X基因对细胞影响的差异.方法 应用基因克隆的方法从慢性HBV感染者血清中获得HBV全X及X基因,构建带有HBV全X基因与X基因的真核表达载体以及带有绿色荧光基团GFP的重组质粒;细胞转染技术将其分别转入HEK293细胞,RT-PCR及Western-blot技术验证HBV全X基因及X基因在细胞内的表达;荧光显微镜下观察其在细胞内的定位情况;MTT法检测细胞增殖率的变化;AnnexinV流式细胞分析技术检测其对细胞凋亡率的影响;TRAP实时荧光定量PCR法检测各组细胞端粒酶活性的变化.结果 成功构建带有HBV全X基因的重组质粒且目的基因能在HEK293细胞内高表达;表达的HBV全X蛋白主要分布在胞核,而X蛋白在胞质、胞核均有分布;转染HBV全X和X基因后细胞增殖率分别为(0.826±0.002)％和(0.805±0.013)％,显著高于转染空质粒(0.691±0.035)％和未转染对照组(0.681±0.018)％,差异具有统计学意义(P＜0.05);转染HBV全X和X基因后细胞凋亡率分别为(25.25±3.02)％及(21.34±2.16)％,显著高于转染空质粒(13.49±1.49)％及未转染细胞对照组(11.37±1.58)％,差异具有统计学意义(P＜0.05);转染全X及X基因细胞的端粒酶活性亦显著高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);全X转染组细胞的增殖率、凋亡率及端粒酶活性均高于X转染组,但差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 HBV全X基因具有促细胞增殖、凋亡以及影响细胞端粒酶活性的作用,其可能通过不同于HBV X基因的细胞内途径影响细胞的生物学功能,从而在HBV相关的原发性肝细胞癌发生发展中起作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘锦锋	西安交通大学医学院第一附属医院传染科	19	11	2.0	2.0
2	赵英仁	西安交通大学医学院第一附属医院传染科	68	241	9.0	11.0
3	崔美灵	西安交通大学医学院第一附属医院传染科	1	1	1.0	1.0
4	张瑜	西安交通大学医学院第一附属医院传染科	31	93	6.0	8.0
5	刘红莉	西安交通大学医学院第一附属医院传染科	6	16	2.0	4.0