人脐静脉内皮细胞制备饲养层对胚胎干细胞生长的支持作用

• 作者: 何志旭 汪浩文 王志华 米蔷
• 来源期刊: 实用儿科临床杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 胚胎干细胞 脐静脉 内皮细胞 饲养层
• 年，卷（期）: 2008,（19）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 1526-1529
• 页数: 4页
• 分类号: R729
• 字数: 4583字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1003-515X.2008.19.019

摘要

目的 探讨人脐静脉内皮细胞是否可作为饲养层支持胚胎干细胞(ESC)的生长,维持EsC的未分化状态.方法 取健康产妇产后的脐带,胶原酶灌注消化脐静脉血管,分离内皮细胞原代培养,并连续传代扩增细胞,Ⅷ因子相关抗原鉴定.采用生长良好的3代以上内皮细胞,经丝裂霉素C(10mg/L)灭活后制备饲养层,将E14.1 ESC接种到该饲养层上进行传代培养,观察ESC的形态学特征,测定不同传代时间的ESC碱性磷酸酶(AKP)活性、十细胞标志物Oct-4的表达,严重联合免疫缺陷(scID)小鼠体内畸胎瘤形成实验鉴定其全能分化特性.结果 人脐静脉血管来源的内皮细胞能够在体外培养过程中生长、增殖旺盛,细胞连续传代10代以上能完整的保持正常的细胞形态学特征和生物学特性.经丝裂霉素C处理后细胞停止增殖,在24h内能较好的保持细胞活力和形态学特征,具备饲养层细胞的基本条件.E14.1 ESC在人脐静脉内皮细胞上传3～8代能较好的保持未分化状态,细胞呈克隆性生长,高度表达AKP及于细胞因子Oct-4;体内伞能分化实验显示:在内皮细胞上牛长6代和lO代以上的E14.1 ESC接种到SCID小鼠6周后均能形成畸胎瘤,含有3个胚层的组织细胞.结论 人脐静脉血管内皮细胞可作为一种来源丰富,取材方便的人源化饲养层细胞,能有效支持ESC的生长,克服了日前人ESC使用动物细胞饲养层带来的异种蛋白污染和致病微生物的危险,解决了ESC临床应用的生物安全性问题.