PCR产物靶向克隆法高效构建携带人内皮型一氧化氮合酶cDNA的重组质粒

• 作者: 王家宁 罗超 谭艳 郭凌郧
• 来源期刊: 郧阳医学院学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 多聚酶链式反应 靶向克隆 人内皮型一氧化氮合酶
• 年，卷（期）: 2008,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 102-105,119,封3
• 页数: 6页
• 分类号: Q781
• 字数: 3920字
• 语种: 中文

摘要

目的:将PCR 扩增产物人内皮型一氧化氮合酶(heNOS)cDNA定向克隆到载体pShuttle-IRES-hrGFP-2以构建重组质粒pShuttle-heNOS-EGFP. 方法:在扩增目的基因的PCR引物5′端加上与线性化载体同源的15个碱基, 使PCR反应产物两端分别带上15个和线性化载体两端同源的碱基序列.EcoR Ⅰ酶切质粒pHCMVsp1A-heNOS,回收heNOS cDNA作为模板,进行PCR扩增.将纯化的PCR产物heNOS cDNA与EcoR V酶切后的线性化载体pShuttle-IRES-hrGFP-2以摩尔数为8∶1 比例混和,在重组酶作用下,25 ℃反应30 min,将PCR产物定向克隆入目标载体pShuttle-IRES-hrGFP-2上,获得阳性重组质粒pShuttle-heNOS-EGFP.重组质粒经PCR、酶切和测序鉴定. 结果:经鉴定, 成功构建出重组质粒pShuttle-heNOS-EGFP. 结论:无需传统的酶切、连接、载体去磷酸化等手段, 利用PCR产物靶向克隆法,可快速、高效完成PCR 产物的定向克隆.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郭凌郧	郧阳医学院附属人民医院临床医学研究所	26	189	9.0	12.0
2	王家宁	郧阳医学院附属人民医院临床医学研究所	119	709	13.0	20.0
3	罗超	郧阳医学院基础医学研究所	16	47	4.0	6.0
4	谭艳	郧阳医学院附属人民医院泌尿外科研究所	9	62	5.0	7.0