插入失活法构建2型猪链球菌突变株

• 作者: 姜永强 李文君 李蓉 王恒樑 袁媛 路玲玲 郑玉玲
• 来源期刊: 中国食品卫生杂志
• 学科: 农学
• 关键词: 链球茵 猪 基因沉默 诱变 插入
• 年，卷（期）: 2008,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 103-107
• 页数: 5页
• 分类号: R15|S855.11
• 字数: 3736字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-8456.2008.02.002

摘要

目的 构建2型猪链球菌突变株05ZYΔ0913,05ZYΔ0936.方法 以05ZY为模版,分别扩增0913、0936基因内部504bp,549bp片段为同源臂,与pSET4S质粒进行连接,将连接产物转入DH5a感受态细胞中,构建栽体0913-pSET4S,0936-pSET4S.然后利用插入失活法,将构建的0913-pSET4S、0936-pSET4S裁体通过电转化导入2型猪链球菌的感受态细胞中,利用壮观霉素抗性筛选得到阳性转化子,并用PCR进行鉴定.结果 筛选到的菌株均能抵抗100μg/ml壮观霉素,经PER鉴定,为失活了目的片(0913和0936片段)的2型猪链球茵突变株.结论 本研究成功构建了2个突变株,为进一步研究目的片段的基因功能奠定了基础.