SCF对体外转染pEGFP-C1/Akt的骨髓间充质干细胞中c-kit、Akt及VEGF表达的影响

• 作者: 刘英 唐海燕 孔宏亮 张宏伟 张强 王欣 胡新华 霍鑫
• 来源期刊: 中国普外基础与临床杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 骨髓间充质干细胞 Akt基因 干细胞因子 血管内皮生长因子
• 年，卷（期）: 2008,（2）
• 所属期刊栏目: 基础与实验研究
• 页码范围: 116-121
• 页数: 6页
• 分类号: Q813
• 字数: 4159字
• 语种: 中文

摘要

目的 克隆构建绿色荧光蛋白(GFP)/Akt表达载体,观察其在鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)中的表达和定位,并探讨干细胞因子(SCF)通过PI3-Akt途径对转染pEGFP-C1/Akt的MSCs中c-kit、Akt和VEGF mRNA及蛋白表达的影响.方法 采用酶切法将Akt重组于GFP表达载体中,经酶切序列鉴定后,将该重组质粒GFP/Akt及GFP空质粒通过脂质体转染骨髓MSCs; 荧光显微镜观察其转染及在细胞中的分布; 分别采用Western blot 和反转录多聚酶链反应(RT-PCR)方法检测pEGFP-C1和pEGFP-C1/Akt转染MSCs后对c-kit、Akt 及VEGF mRNA和蛋白表达的影响,pEGFP-C1/Akt转染MSCs后不同浓度SCF对c-kit、Akt及VEGF mRNA和蛋白表达的影响. 结果 GFP/Akt基因表达载体经酶切鉴定和测序分析后确认构建成功,并在MSCs中表达.荧光显微镜下见pEGFP-C1转染后,绿色荧光均匀分布于整个细胞中; pEGFP-C1/Akt转染后,绿色荧光分布于细胞质中.与pEGFP-C1组相比较,pEGFP-C1/Akt转染组Akt及VEGF 的mRNA和蛋白表达均明显增强(P<0.05), c-kit mRNA和蛋白表达则无明显变化(P>0.05).加入SCF后其能增强实验组(SCF+pEGFP-C1/Akt)和对照组(SCF+pEGFP-C1)中c-kit、Akt及VEGF的 mRNA和蛋白表达,并且随着SCF的浓度增高该作用则越明显(P<0.05); 与对照组相比较,实验组c-kit mRNA和蛋白的表达无明显变化(P>0.05),而Akt和VEGF mRNA和蛋白表达则明显增强(P<0.01).结论 成功构建GFP/Akt融合基因表达载体在MSCs中表达,可诱导Akt及VEGF mRNA和蛋白的表达; SCF可能通过PI3/Akt途径刺激c-kit、Akt 及VEGF mRNA和蛋白的表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王欣	中国医科大学附属第一医院干诊科	80	425	11.0	17.0
2	唐海燕	大庆油田总医院内分泌科	32	100	5.0	9.0
3	胡新华	中国医科大学附属第一医院干诊科	58	302	9.0	14.0
4	孔宏亮	中国医科大学附属第一医院循环科	17	89	6.0	9.0
5	霍鑫	中国医科大学附属第一医院干诊科	11	62	5.0	7.0
6	刘英	中国医科大学附属第一医院内分泌科	20	98	5.0	9.0
7	张宏伟	中国医科大学附属第一医院干诊科	13	32	3.0	5.0