抗PLA2G13多克隆和单克隆抗体的制备与鉴定

• 作者: 刘莹 唐小波 孙启鸿 朱大岭 李淑珍 柳晓兰 陈苗 高建恩
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: PLA2G13 原核表达 融合蛋白 抗体制备
• 年，卷（期）: 2008,（4）
• 所属期刊栏目: 抗体工程
• 页码范围: 389-392
• 页数: 4页
• 分类号: R392.11
• 字数: 3832字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1007-8738.2008.04.025

摘要

目的:制备分泌型的磷脂酶A2 G13(group XIII secreted phospholipase A2,PLA2G13)的多克隆抗体(pAb)和单克隆抗体(mAb),并对抗体进行特性鉴定.方法:以人正常肝cDNA文库为模板,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-PLA2G13(即PLA2G13-GST)和pET-32a-PLA2G13(即PLA2G13-His).PLA2G13-GST融合蛋白作为免疫原制备兔pAb和鼠mAb.采用Western blot鉴定兔抗人PLA2G13 pAb的特异性.采用Western blot和Immunohistochemistry鉴定鼠抗人PLA2G13 mAb的特异性.结果:PLA2G13-GST和PLA2G13-His融合蛋白在均大肠杆菌中以包涵体形式大量表达.Western blot鉴定表明,兔抗人PLA2G13 pAb可特异地识别HepG2细胞系中相对分子质量(Mr)约19700的蛋白,与文献报道中PLA2G13的实际Mr相符.通过筛选共获得8株可稳定分泌抗PLA2G13的杂交瘤细胞株,Western blot鉴定表明6株可识别重组人PLA2G13蛋白,免疫组织化学鉴定显示2株可特异性识别正常肝组织中的PLA2G13蛋白.结论:成功地制备了抗人PLA2G13兔pAb和鼠mAb,为进一步研究PLA2G13的功能提供了特异性检测工具.