基于thyA基因的大肠杆菌染色体-质粒平衡致死系统的构建与应用

• 作者: 吉玉辉 夏兵 夏晓莉 孙怀昌 张鑫宇
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: ThyA-大肠杆菌 染色体-质粒平衡致死系统 构建 应用
• 年，卷（期）: 2008,（11）
• 所属期刊栏目: 病原生物学
• 页码范围: 919-924
• 页数: 6页
• 分类号: S852.612
• 字数: 5813字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-4696.2008.11.001

摘要

将大肠杆菌DH5α在含胸腺嘧啶核苷和三甲氧苄二氨嘧啶的琼脂平板上培养,获得了遗传稳定的ThyA-大肠杆菌DH5α21株.用PCR扩增野生菌和ThyA-大肠杆菌的thyA基因,将测定的序列与野生型thyA基因相比,6号突变株的thyA基因第92位碱基发生G→A转换,导致第31位甘氨酸被天冬氨酸替换,4、7和13号突变株的thyA基因从第73位连续缺失6个碱基,导致第25位甘氨酸和第26位苏氨酸缺失.经PCR扩增的包括启动子在内的鼠伤寒沙门菌thyA基因与野生型大肠杆菌DH5α thyA基因的同源性为86%.以鼠伤寒沙门茼thyA基因为选择标记,构建了含人溶菌酶基目的真核表达载体pDTALYZ,以ThyA-大肠杆菌为受体菌,构建了染色体-质粒平衡致死系统.在相同条件下,pDTALYZ转化ThyA-大肠杆菌的效率高于以卡那霉素抗性基因为选择标记的pcDNAKLYZ转化野生大肠杆菌的效率;在发酵培养过程中,两种重组菌的生长速率相似,质粒丢失率分别为25%和10%,湿菌重分别为57.68 g/L和51.00g/L,重组质粒产量分别为134.9 mg/L和135.0 mg/L.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙怀昌	扬州大学兽医学院	138	1042	15.0	25.0
2	张鑫宇	扬州大学兽医学院	40	142	6.0	10.0
3	夏晓莉	扬州大学兽医学院	24	78	6.0	8.0
4	吉玉辉	扬州大学兽医学院	2	2	1.0	1.0
5	夏兵	扬州大学兽医学院	1	1	1.0	1.0