利用免疫共沉淀技术研究RSV CP、SP和NSvc4蛋白的互作

• 作者: 兰汉红 吴祖建 牛晓庆 王萍 秦梅玲 谢联辉 谢荔岩 鹿连明
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 水稻条纹病毒 免疫共沉淀 蛋白互作
• 年，卷（期）: 2008,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 891-897
• 页数: 7页
• 分类号: S188
• 字数: 4804字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2008.05.028

摘要

为了检测水稻条纹病毒(Rice sgipe virus,RSV)外壳蛋白(coat protein,CP)、病害特异蛋白(disease-special protein,SP)和可能的运动蛋白NSvc4自身和两两之间的互作关系,首先通过PCR扩增获得了分别融合有HA或c=Myc标签的RSV CP、SP和NSvc4基因,并将其插入到植物表达载体pEGAD或pKYLX71:35S2中.重组质粒转化根癌农杆菌(Agrobactctium tume-faciens)EHA105后,将含有不同重组质粒的根癌农杆菌菌液混合后注射烟草(Nicotiana benthamiana)叶片.提取烟草中瞬时表达的蛋白,以HA或c-Myc抗体进行免疫共沉淀试验,最后免疫混合物通过c-Myc抗体或HA抗体进行Western blot检测,确定蛋白的互作情况.结果表明,RSV CP蛋白自身能够发生互作,而CP与SP,CP与NSvc4,SP与SP,SP与NSvc4,及NSvc4与NSvc4蛋白之间均未有检测到互作现象.