植物叶片染色质免疫共沉淀方法的优化

• 作者: 张媛媛 张玉 李丹静 缪颖 邓班 黄冬梅
• 来源期刊: 《福建农林大学学报（自然科学版）》
• 关键词: 叶片 染色质免疫共沉淀 超声破碎条件 抗体用量 免疫沉淀效率
• 年，卷（期）: 2018,（3）
• 所属期刊栏目: 生命科学
• 页码范围: 329-335
• 页数: 7页
• 分类号: Q291
• 语种: 中文
• DOI: 10.13323/j.cnki.j.fafu(nat.sci.).2018.03.010

摘要

以拟南芥成熟叶片为材料,探索3种不同型号超声破碎仪器的染色质免疫共沉淀(ChIP)超声破碎条件.根据超声破碎结果推荐使用Covaris M220 Focused-ultrasonicator仪器,并将该仪器破碎条件设置为10% duty cycle、75 Watts Intensity Peak Incident power、200 cycle per Burst、7℃ bath temperature、破碎时间12 min时,可获得约500 bp的DNA片段.同时,为检测不同H3K9ac抗体用量对染色质免疫沉淀效率的影响,通过半定量和实时荧光定量PCR检测确定初始量0.25 g的拟南芥叶片所需H3K9ac抗体的最适用量为3 μL.此外,以不同衰老程度的水稻旗叶为材料,根据上述破碎条件,进一步优化超声破碎时间,同样可以获得合适的DNA片段,根据优化的样品与抗体用量比例,通过免疫沉淀可以获得适用于后期实时定量PCR(ChIP-qPCR)和高通量测序(ChIP-seq)分析的DNA样品.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	缪颖		14	11	2.0	2.0
2	张媛媛	福建农林大学生命科学学院分子细胞和系统生物学中心	3	7	1.0	2.0
3	张玉	福建农林大学生命科学学院分子细胞和系统生物学中心	2	2	1.0	1.0
4	黄冬梅	福建农林大学生命科学学院分子细胞和系统生物学中心	2	1	1.0	1.0
5	邓班	福建农林大学生命科学学院分子细胞和系统生物学中心	1	1	1.0	1.0
6	李丹静	福建农林大学生命科学学院分子细胞和系统生物学中心	1	1	1.0	1.0