用8质粒病毒拯救系统产生冷适应减毒的重组A型人流感病毒的研究

• 作者: 刘秀梵 张钰 杨鹏辉 王希良 石辛甫 罗德炎 邢丽 颜艳 龙进学
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 流感病毒 反向遗传学 8质粒拯救系统 重组流感病毒
• 年，卷（期）: 2008,（2）
• 所属期刊栏目: 病毒学
• 页码范围: 139-143
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 4864字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0254-5101.2008.02.013

摘要

目的 利用流感病毒8质粒病毒拯救系统,产生冷适应减毒的重组A型人流感病毒,建立以冷适应流感病毒株为拯救骨架的反向遗传学技术平台.方法 以冷适应、温度敏感、减毒的A/Ann Arbor/6/60(H2N2)流感病毒株作为拯救病毒的骨架,人工合成了该病毒株的6个内部基因片段,即PB2、PB1、PA、NP、M和NS,同时引入5个氨基酸突变作为标签.6个基因片段通过与改造后的转录载体pAD3000连接,构建6个基因的拯救载体,经测序获得序列准确的拯救质粒:pMDV-A-PB2、pMDV-A-PB1、pMDV-A-PA、pMDV-A-NP、pMDV-A-M、pMDV-A-NS.结果 6质粒与PR8的表面基因HA和NA进行"6+2"组合的病毒拯救,8个重组质粒共转染COS-1细胞,成功拯救出了具有血凝活性的冷适应减毒的重组A型人流感病毒,命名为rMDV-A.鸡胚尿囊液中重组病毒的血凝(HA)效价为1∶2 9～1∶2 10.结论 构建的A/Ann Arbor/6/60的6个内部基因的病毒骨架拯救系统,为深入研究冷适应减毒人流感病毒的基因功能和新型疫苗研发提供了试验材料.