连续荧光监测法测定蛋白酶体活性及其在筛选蛋白酶体抑制剂中的应用

• 作者: 吕亚萍 周永列 胡惟孝 许武林
• 来源期刊: 中国临床药理学与治疗学
• 关键词: 连续荧光监测法 蛋白酶体 抑制剂 硼替佐米 四嗪二甲酰胺
• 年，卷（期）: 2008,（10）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1127-1133
• 页数: 7页
• 分类号: R965.2
• 语种: 中文

摘要

目的:建立用连续荧光监测法测定蛋白酶体活性的方法,研究其在筛选蛋白酶体抑制剂中的应用价值.方法:用特异性荧光多肽底物suc-Leu-Leu-Val-Tyr-AMC(Suc-LLVT-AMC)、Z-Val-Val-Arg-AMC(ZVVA-AMC)、Z-Leu-Leu-Glu-βNA(ZLLG-βNA),分别测定蛋白酶体的糜凝乳蛋白酶样(chy-mottypsin-like,CT-L)、胰蛋白酶样(ttypsin-like,T-L)和肽基谷氨酰肽水解酶样(PGPH-like,PGPH-L)活性,对测定条件优化,并进行方法学评价.用该法测定了硼替佐米(PS-341)和四嗪二甲酰胺(ZG-DHu-1)对纯20S蛋白酶体和B16、Nalnalwa细胞蛋白酶体提取物抑制作用.结果:连续荧光监测法测定蛋白酶体活性的最适pH为8.2;0.3 g/L SDS 仅对CT-L活性有激活作用;CT-L、T-L、PGPH-L的Km分别为3.55、4.12、4.88,μmol/L;酶反应进程曲线的线性期达20 min;线性范围为测定纯20S蛋白酶体时,其蛋白浓度分别达100、120、100 μg/L,测定B16细胞蛋白酶体提取物时,其蛋白浓度均达200 mg/L;精密度的批内CV为(2.25-5.78)%,批间CV在(3.75-8.42)%.用该法测定了PS-341对20S蛋白酶体CT-L、T-L、PGPH-L的抑制活性,其IC50 分别为12.36、12.42、24.40 nmol/L;测定ZGDHu-1对20S蛋白酶体抑制活性,IC50分别为2.24、0.92、0.51/μmol/L.结论:连续荧光监测法测定蛋白酶体活性为快速、有效、大规模筛选蛋白体抑制剂类药物提供了一个技术平台,也为临床上应用蛋白酶体抑制剂治疗提供了一个有用的检测指标.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周永列	浙江省人民医院中心实验室	159	768	12.0	20.0
2	胡惟孝	浙江工业大学药学院	68	383	10.0	15.0
3	吕亚萍	浙江工业大学药学院	35	203	8.0	12.0
4	许武林	浙江省人民医院中心实验室	17	98	5.0	9.0