生长激素促分泌素受体基因敲除小鼠胚胎干细胞的建立

• 作者: 张永彦 王志刚 王维刚 费俭 郑起
• 来源期刊: 中国普外基础与临床杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 基因敲除 胚胎干细胞 生长激素促分泌素受体
• 年，卷（期）: 2008,（10）
• 所属期刊栏目: 基础与实验研究
• 页码范围: 733-738
• 页数: 6页
• 分类号: R34|Q78
• 字数: 4818字
• 语种: 中文

摘要

目的 建立生长激素促分泌素受体(ghrelin receptor,GHS-R)基因敲除小鼠胚胎干细胞(ES细胞)杂合子模型,为研究GHS-R基因的功能奠定基础.方法 用TK-neo置换原X-pPNT载体的PGK-neo构建目标载体.以小鼠基因组DNA为模板, 用PCR方法扩增2条同源臂,将其按照一定方向装入含有TK-neo的X-pPNT载体,并测序鉴定.载体线性化及纯化后电穿孔转染小鼠ES细胞,用G418和更昔洛韦(Gancyclovir)对电穿孔转染后的ES细胞进行正、负筛选培养,得到双药抗性ES细胞,克隆后抽提基因组DNA,分别用PCR方法鉴定2条同源臂,并测序确定成功同源重组的ES细胞克隆.结果 改建X-pPNT载体成功,PCR获得2条同源臂片段,测序正确,并按一定方向装入打靶载体,ES细胞转染后经双药筛选得到328个阳性ES细胞克隆,PCR及测序鉴定证实3个克隆发生同源重组.结论 本研究成功获得了GHS-R(-/+)杂合子小鼠ES细胞克隆,为进一步通过显微注射及杂交育种获得GHS-R基因敲除小鼠打下了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郑起	上海交通大学附属第六人民医院普外科	165	920	14.0	20.0
2	王志刚	上海交通大学附属第六人民医院普外科	94	602	13.0	21.0
3	费俭		26	107	6.0	9.0
4	王维刚	上海交通大学附属第六人民医院普外科	9	34	3.0	5.0
5	张永彦		1	2	1.0	1.0