牛脉络膜微血管内皮细胞纯化和体外培养的改良方法

• 作者: 惠延年 朱洁 王雨生 赵炜
• 来源期刊: 眼科新进展
• 学科: 医学
• 关键词: 脉络膜微血管内皮细胞 牛 细胞培养
• 年，卷（期）: 2008,（3）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 161-165
• 页数: 5页
• 分类号: R773.4
• 字数: 4463字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1003-5141.2008.03.001

摘要

目的 建立快速、简便地培养脉络膜微血管内皮细胞的方法,为脉络膜新生血管疾病的研究提供细胞模型.方法 显微分离牛脉络膜微血管,采用1 g·L-1胶原酶一步法消化,并采用免疫磁珠分选脉络膜微血管内皮细胞,使用内皮细胞培养基进行原代培养.利用光学和电子显微镜进行形态学观察,利用Von Willebrand因子免疫荧光染色及Dil-Ac-LDL吞噬实验进行细胞学鉴定,利用管腔形成实验观察内皮细胞形成管腔能力.结果 采用本研究改良的方法可以获得纯度高达95%的脉络膜微血管内皮细胞,外观呈细长形,融合后呈典型铺路石样外观.电子显微镜观察可见胞浆内靠近核膜外的Weibel-Palade小体(棒状小体);免疫荧光显示Von Willebrand因子表达阳性,Dil-Ac-LDL吞噬实验阳性;在凝胶中可以形成明显管腔结构.结论 本研究改良的方法成功地分离并纯化了牛脉络膜微血管内皮细胞,可在短期内快速简便地获得足够数量的内皮细胞.