重组腺病毒介导siRNA抑制大鼠肝细胞NF-κB p65的表达

• 作者: 宇汝胜 汪泳 钱海鑫
• 来源期刊: 苏州大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 核转录因子-κB RNA干扰 腺病毒
• 年，卷（期）: 2008,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 525-528
• 页数: 4页
• 分类号: R318.14
• 字数: 3858字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-0399.2008.04.003

摘要

目的 构建重组腺病毒Ad-NF-κKB p65-siRNA,并观察其抑制大鼠肝细胞NF-κB p65表达的效果.方法 (1)筛选针对大鼠NF-κB p65特异性siRNA靶序列,设计合成其对应的双链DNA,插入到pShuttle-H1中,得到psiRNA-NF-κB p65质粒.将构建好的psiRNA-NF-κB p65质粒与腺病毒骨架载体pAdEasy-1在大肠杆菌BJ5183中进行重组,酶切鉴定、293A细胞包装、扩增,得到蕈组腺病毒Ad-NF-κB p65-siRNA.(2)将构建好的Ad-NF-κB p65-siRNA转染大鼠肝细胞株BRL,48 h后,采用RT-PCR和Western blot检测NF-κB p65表达.结果 成功地构建了重组腺病毒Ad-NF-κB p65-siRNA;Ad-NF-κB p65-siRNA转染大鼠肝细胞48 h后,NF-κB的mRNA水平下降了 81%,细胞内的NF-κB蛋白浓度下降了71%.结论 腺病毒介导的RNAi技术体外显著地抑制大鼠肝细胞NF-κB p65的表达.