质粒介导外源性微小RNA干扰PTTG1表达抑制恶性人脑胶质瘤细胞增殖和侵袭

• 作者: LU Yi-cheng LUO Chun 白如林 胡国汉 黄庆锋
• 来源期刊: 中华神经医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 垂体瘤转化基因1 微小RNA 神经胶质瘤 细胞增殖 肿瘤侵润
• 年，卷（期）: 2008,（8）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 757-761
• 页数: 5页
• 分类号: R730.264
• 字数: 4232字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1671-8925.2008.08.001

摘要

目的 观察垂体瘤转化基因1(PTTG1)在恶性人脑胶质瘤U251细胞增殖和侵袭中的作用.方法 设计并合成2对靶向PTTG1 mRNA的寡核苷酸片段,将其连接pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR载体构建表达微小RNA真核载体MIR-1、MIR-2;将连接产物转化到大肠杆菌DH5α感受态细胞,经PCR筛选阳性克隆、测序鉴定;脂质体转染法将重组质粒转入U251细胞,同时设转染阴性对照序列的阴性对照组(转染Neg组)和空白组;实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time PCR)分析PTTG1 mRNA抑制效牢:Western印迹测定PTTG1蛋白的表达量改变:MTT法检测U251细胞增殖的改变:Matrigel侵袭实验检测U251细胞侵袭力的改变.结果 转染后,转染MIR-2组PTTG1 mRNA较空白组和转染Neg组下降为87.6%,PTTG1蛋白表达明显少于其他组:转染MIR-2组U251细胞不同时间点生长抑制率为10.7%～34.7%;Matrigel侵袭实验结果 示MIR-2组穿过人工基底膜U251细胞数减少.相对百分率为12.3%±1.0%,明显低于空白组(24.7%±1.4%)和转染Neg组(24.0%±2.0%),差异有统计学意义(P＜0.05).结论人脑胶质瘤U251细胞的PTTG1表达可被质粒导入的外源性微小RNA有效抑制,进而抑制细胞增殖,逆转恶性胶质瘤U251细胞侵袭、浸润.